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						賽爾瑞成（北京）生命科學(xué)技術(shù)有限公司
            中級會員 | 第8年
            
					
            
				
            
			
            
		
            
	
            
	
	
            
		
            
			
		
            
	
            

            

	
            
		
            
			
			
            
							
            
					
            重組人白細(xì)胞介素2主治功能和禁忌事項詳細(xì)解答2021/03/18
            
					
            
				重組人白細(xì)胞介素2所屬藥物之一，本品是一種淋巴因子，可使細(xì)胞毒性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞增殖，并使其殺傷活性增強，還可以促進淋巴細(xì)胞分泌抗體和干擾素，具有促進機體免疫反應(yīng)等作用。重組人白細(xì)胞介素2功能主治：1.用于腎細(xì)胞癌、黑色素瘤、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、直腸癌、淋巴癌、肺癌等惡性腫瘤的治療，用于癌性胸腹水的控制，也可以用于淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞的培養(yǎng)。2.用于手術(shù)、放療及化療后的腫瘤患者的治療，可增強機體免疫功能。3.用于先天或后天免疫缺陷癥的治療，提高病人細(xì)胞免疫功能和抗
					
            
				
            
								
            
					
            重組人干擾素α2b的作用機制和禁忌掌握了嗎2021/03/12
            
					
            
				干擾素是一種很強大的藥劑，它被使用在醫(yī)學(xué)中的很多方面，特別是重組人干擾素，對于人體的很多疾病都有著很重大的作用。重組人干擾素α2b具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用，也是衛(wèi)健委推薦的藥物之一。與機體內(nèi)的細(xì)胞受體結(jié)合后，一方面誘導(dǎo)組織細(xì)胞分泌抗病毒蛋白，激活體內(nèi)的一些酶，促使病毒mRNA降解，進而導(dǎo)致病毒蛋白合成受阻，抑制病毒復(fù)制；另一方面，通過促進CTL細(xì)胞增值、激活NK細(xì)胞殺傷功能、增強巨噬細(xì)胞吞噬能力，增強免疫清除能力，發(fā)揮清除病毒的作用。重組人干擾素α2b是一類具有廣譜抗病毒、抗增殖和免疫調(diào)
					
            
				
            
								
            
					
            重組蛋白真核表達系統(tǒng)與原核表達系統(tǒng)的區(qū)別2021/03/03
            
					
            
				重組蛋白真核表達采用原核表達系統(tǒng)進行研究，主要方法是將已克隆到目的基因DNA的片段的載體轉(zhuǎn)化到細(xì)菌中，通過IPTG誘導(dǎo)和終純化獲得所需的目的蛋白。其優(yōu)點是可以在短時間內(nèi)獲得基因表達產(chǎn)物，所需成本相對較低。目前的表達系統(tǒng)各有利弊，但一般理想的表達系統(tǒng)滿足以下幾點：一是特異性，不受其他內(nèi)源性因素影響，只能通過外源性無毒物激活。二是不干擾，不干擾細(xì)胞通路。以及誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)性、生物利用度、可塑性和劑量依賴性。因此，在選擇表達系統(tǒng)時，必須充分考慮各種因素，如蛋白質(zhì)性質(zhì)、實驗條件、生產(chǎn)成本、表達水平和安全性
					
            
				
            
								
            
					
            重組人BMP4重組蛋白和天然蛋白有什么區(qū)別2021/02/03
            
					
            
				重組人BMP4蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式，原核細(xì)胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài)，真核細(xì)胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存，這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定，在-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進行溶解，其中溶解的方法非常關(guān)鍵，因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細(xì)注意。重組人BMP4的分泌表達優(yōu)點:1、一些可被細(xì)胞內(nèi)蛋白酶所降解的蛋白質(zhì)分泌到周質(zhì)或培養(yǎng)基中可增加其穩(wěn)定性；2、有些在細(xì)胞內(nèi)表達時無活性的蛋白分泌表達時能夠按適當(dāng)?shù)姆绞竭M行準(zhǔn)確折疊，增加到蛋白
					
            
				
            
								
            
					
            真核表達細(xì)胞常見表達載體有哪些2021/01/18
            
					
            
				真核表達細(xì)胞表達產(chǎn)物在分子結(jié)構(gòu)、理化特性和生物學(xué)功能方面更接近于天然的高等生物蛋白質(zhì)分子。原核基因表達調(diào)控與真核存在很多共同之處。但因原核生物沒有細(xì)胞核，亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)及其基因組結(jié)構(gòu)要比真核簡單得多。1.原核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)特點⑴σ因子識別特異啟動序列，不同的σ因子決定特異基因的轉(zhuǎn)錄激活，決定mRNA,rRNA和tRNA基因的轉(zhuǎn)錄。⑵除個別基因外，原核生物絕大多數(shù)基因按功能相關(guān)性成簇的串聯(lián)、密集于染色體上，共同組成一個轉(zhuǎn)錄單位——操縱子。一個操縱子只含一個啟動序列及數(shù)個可轉(zhuǎn)錄的編碼基因。2.真核細(xì)胞結(jié)構(gòu)
					
            
				
            
								
            
					
            哺乳動物瞬時表達重組蛋白服務(wù)技藝純熟，滿足制備需要2021/01/14
            
					
            
				哺乳動物細(xì)胞自身具備蛋白折疊和翻譯后修飾的功能，其表達的重組蛋白在分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和生物學(xué)功能方面接近于天然的高等生物蛋白質(zhì)分子，更有可能獲得與天然分子相同的生物活性。哺乳動物瞬時表達重組蛋白服務(wù)系統(tǒng)能表達天然結(jié)構(gòu)完整的重組蛋白，是廣泛應(yīng)用的人類復(fù)雜糖基化蛋白的表達系統(tǒng)，生物活性接近于天然蛋白質(zhì)，是活性蛋白因子及各類受體蛋白的表達系統(tǒng)，在生物制藥領(lǐng)域應(yīng)用較廣,60%以上的的藥用蛋白產(chǎn)品由哺乳動物細(xì)胞表達系統(tǒng)獲得。哺乳動物細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染能在短期內(nèi)快速表達高活性蛋白，滿足蛋白制備的需求。哺乳動物瞬時
					
            
				
            
								
            
					
            哺乳動物細(xì)胞真核表達系統(tǒng)為科學(xué)研究提供助力2021/01/06
            
					
            
				哺乳動物細(xì)胞真核表達系統(tǒng)是哺乳動物細(xì)胞經(jīng)過翻譯和再加工后產(chǎn)生的外源蛋白，在活性上遠(yuǎn)優(yōu)于原核表達系統(tǒng)和酵母、昆蟲細(xì)胞等真核表達系統(tǒng)，更接近天然蛋白。哺乳動物細(xì)胞表達系統(tǒng)可以提供較接近自然狀態(tài)的重組人蛋白的翻譯后修飾。在蛋白質(zhì)表達過程中，會形成接近天然蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)折疊和聚合，具有活性蛋白質(zhì)所必需的空間結(jié)構(gòu)和修飾。哺乳動物細(xì)胞經(jīng)過翻譯和再加工后產(chǎn)生的外源蛋白比原核表達系統(tǒng)和真核表達系統(tǒng)如酵母和昆蟲細(xì)胞要好得多，更接近天然蛋白。這一特性使得哺乳動物細(xì)胞表達系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于重組蛋白藥物，特別是治療性重組單
					
            
				
            
								
            
					
            化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞基礎(chǔ)操作方法2020/12/25
            
					
            
				化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞該菌株衍生自大腸桿菌菌株B，具有l(wèi)on和ompT蛋白酶缺陷的優(yōu)點，是目前應(yīng)用廣泛的表達宿主菌之一，其操作方法如下：1、化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，6分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手滑動EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。2、42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置5分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。3、向離心管中加入0.9mL室溫S.O.C.(S.O.C.營養(yǎng)豐富，可提高轉(zhuǎn)化效率)或LB培養(yǎng)基。4、30℃，250rpm復(fù)蘇60分鐘。當(dāng)
					
            
				
            
								
            
					
            重組人干擾素α2b用法用量,僅供參考2020/12/22
            
					
            
				藥物是不能亂吃的，需要在醫(yī)生的指導(dǎo)下服用！重組人干擾素α2b又叫長生扶康，是一種微黃色或白色疏松體，溶解后為澄明液體，無肉眼可見的不溶物。重組人干擾素α2b通過肌肉或皮下注射，血液濃度達峰時間為3.5～8小時，消除半衰期為4～12小時。腎臟分解代謝為干擾素主要消除途徑，而膽汁分泌與肝臟代謝的消除是重要途徑。肌內(nèi)注射或皮下注射的吸收超過80%。重組人干擾素α2b用法用量1.慢性乙型肝炎：皮下或肌內(nèi)注射，3～6×106IU/日，連用四周后改為3次/周，連用16周以上。2.慢性粒細(xì)胞白血?。?～5×1
					
            
				
            
								
            
					
            哺乳動物細(xì)胞真核表達產(chǎn)物接近于天然高等生物蛋白質(zhì)分子2020/12/15
            
					
            
				哺乳動物細(xì)胞真核表達系統(tǒng)在表達過程中有翻譯后修飾和折疊的功能，這一特點使其蛋白更接近天然蛋白，具備天然蛋白必須的空間結(jié)構(gòu)和修飾，與天然蛋白有相同的生物活性，哺乳動物細(xì)胞表達系統(tǒng)在功能蛋白、抗體生產(chǎn)、臨床疫苗的研發(fā)和生產(chǎn)中應(yīng)用較為廣泛。原核表達系統(tǒng)具有表達水平高、操作簡單、周期短、易于大規(guī)模高密度培養(yǎng)、成本低等優(yōu)點，而對于全抗體和糖蛋白類生物藥物來說，表達產(chǎn)物多肽鏈的折疊、二硫鍵的形成、糖基化的有無以及糖基化的類型常常影響表達產(chǎn)物的合成分泌、生物活性、體內(nèi)穩(wěn)定性以及免疫原性等特性。由于原核細(xì)胞缺少
					
            
				
            
								
            
					
            重組蛋白真核表達系統(tǒng)技術(shù)平臺的特色2020/12/11
            
					
            
				重組蛋白作為生物制藥在醫(yī)學(xué)中作用顯著，一般用轉(zhuǎn)基因動物的乳腺產(chǎn)生。重組蛋白真核表達包括酵母表達系統(tǒng)、桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞表達系統(tǒng)、腺病毒表達系統(tǒng)等。一般可以正確折疊，包含各種修改。但是價格高，周期長。重組蛋白真核表達系統(tǒng)技術(shù)平臺的特色快速、highly-stringent篩選：只篩選到高表達穩(wěn)定株；4～5個月獲得穩(wěn)定高表達細(xì)胞株（常規(guī)方法要9～12個月）高效表達：*啟動子和*分泌信號肽，很容易達到30p/c/d/以上（傳統(tǒng)方法需要用藥物篩選9～11輪以上才能達到）穩(wěn)定表達：表達質(zhì)粒上的AGE穩(wěn)定子
					
            
				
            
								
            
					
            真核細(xì)胞培養(yǎng)時支原體污染表現(xiàn)以及解決方式2020/12/08
            
					
            
				支原體是一種特殊的微生物，在哺乳動物（包括人類）、爬行動物、昆蟲和植物中廣泛分布。它是小、較為簡單的可自我復(fù)制的原核生物，大小僅為0.2-0.8um。支原體的基因組僅為0.58-2.20Mb，其自身生物合成能力有限，因此大部分營養(yǎng)物質(zhì)都要依賴于宿主。在真核細(xì)胞培養(yǎng)過程中，支原體感染發(fā)生率達到63%，因而細(xì)胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個世界性的難題。細(xì)胞培養(yǎng)中常遇見的有細(xì)菌污染、真菌污染、支原體污染、病毒污染等。說起支原體污染，估計細(xì)胞培養(yǎng)的同學(xué)就開始犯愁了，細(xì)胞培養(yǎng)的老手都知道，支原體污染非常不
					
            
				
            
								
            
					
            化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞的規(guī)范操作方法2020/12/04
            
					
            
				化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是常規(guī)克隆和亞克隆實驗應(yīng)用較為合適的解決方案。經(jīng)氯化鈣處理，促進質(zhì)粒DNA黏附于感受態(tài)細(xì)胞膜上。將感受態(tài)細(xì)胞通過水浴熱激，使細(xì)胞膜孔打開，從而質(zhì)粒可以進入。操作方法：（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進行）1、取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。以下實驗以100μl感受態(tài)細(xì)胞為例。2、向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入
					
            
				
            
								
            
					
            不管是從應(yīng)用還是制備,多克隆抗體與單克隆抗體都有很大區(qū)別2020/11/26
            
					
            
				多克隆抗體就是用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動物，刺激機體多個B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對多種抗原表位的不同抗體后，所獲得的免疫血清實際上是含有多種抗體的混合物。由一種抗原決定簇刺激機體，由一個B淋巴細(xì)胞接受該抗原刺激所產(chǎn)生的抗體稱之為單克隆抗體。由多種抗原決定簇刺激機體，相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體。多克隆抗體與單克隆抗體的應(yīng)用比較（1）多克隆抗體的應(yīng)用一種良好的多克隆抗血清含有抗某種抗原不同表位的多種抗體。由于多克隆抗血清通常包含抗某一抗原的不同表位的抗
					
            
				
            
								
            
					
            M15化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞操作方法看似簡單,細(xì)節(jié)很重要2020/11/24
            
					
            
				M15化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌M15菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。它能表達lac阻遏蛋白，抑制T5強啟動子的表達。同時，pREP4還賦予宿主菌株卡那霉素抗性。pREP4是從pACYC改造而來的，含有p15A復(fù)制子。它能夠與所有帶ColE1復(fù)制起點的質(zhì)粒共存。主要特點使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達108，-80℃保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。recA1和endA1突變阻止對克隆DNA的修飾或?qū)λ拗骶旧獶NA的重組，提高純化質(zhì)粒的產(chǎn)量和質(zhì)量。M15化學(xué)感受態(tài)
					
            
				
            
								
            
					
            重組人白介素-11藥物副反應(yīng)（一般不良反應(yīng)）2020/11/18
            
					
            
				重組人白介素-11是由造血微環(huán)境基質(zhì)細(xì)胞和部分間葉細(xì)胞產(chǎn)生的多效性細(xì)胞因子。IL-11通過與細(xì)胞表面特異性受體-配體結(jié)合鏈IL-11Ｒα結(jié)合，并連接到信號傳導(dǎo)鏈可溶性糖蛋白130(gp130)后發(fā)揮其生物學(xué)作用，可以直接作用于骨髓巨核系祖細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、上皮細(xì)胞和肝細(xì)胞，具有促進巨核細(xì)胞和血小板生成、調(diào)控免疫、抗炎和保護黏膜上皮等多種功能。IL-11的促造血功能主要表現(xiàn)在直接刺激造血干細(xì)胞和巨核系祖細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)巨核細(xì)胞分化成熟，促進高倍性巨核細(xì)胞生成，增加單個巨核細(xì)胞血小板的產(chǎn)量，從
					
            
				
            
								
            
					
            重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子（重組人bFGF）簡介2020/11/17
            
					
            
				70年代中期，Gospodarowicz從腦垂體中純化出一種細(xì)胞生長因子，因其能促進成纖維細(xì)胞增殖，故命名為成纖維細(xì)胞生長因子(fibrobastgrowthfactor，F(xiàn)GF)。進一步研究表明，F(xiàn)GF按等電點的不同，可分為堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basicfibrobastgrowthfactor，bFGF)和酸性成纖維細(xì)胞生長因子(acidfibrobastgrowthfactor，aFGF)。bFGF的等電點為9.6，aFGF的等電點為5.6均為不含糖的肽類，有約56%相同氨基酸排列順序
					
            
				
            
								
            
					
            重組人干擾素α2b具有廣譜抗病毒作用2020/11/14
            
					
            
				重組人干擾素是一種醫(yī)藥品，適用于治療惡性腫瘤、亞急性重癥肝炎、肝纖維化（早期肝硬化）、骨髓增生異常綜合癥、感染與損傷性疾病、系統(tǒng)性硬皮病、病毒性疾病、異位性皮炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等癥狀。干擾素與細(xì)胞表面受體結(jié)合誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生多種抗病毒蛋白,抑制病毒在細(xì)胞內(nèi)繁殖，提高免疫功能包括增強巨噬細(xì)胞的吞噬功能，增強淋巴細(xì)胞對靶細(xì)胞的細(xì)胞毒性和天然殺傷性細(xì)胞的功能。重組人干擾素主要成份為α2b，輔料為鹽酸精氨酸、聚山梨酯80、醋酸鈉專（三水）、冰屬醋酸。其主要成份α2b系由含有表達人干擾素α2b基因的大腸桿菌，經(jīng)
					
            
				
            
								
            
					
            重組蛋白真核表達與原核表達如何選擇2020/11/09
            
					
            
				重組蛋白真核表達包括酵母表達系統(tǒng)、桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞表達系統(tǒng)、腺病毒表達系統(tǒng)等。一般可以正確折疊，包含各種修改。但是價格高，周期長。重組蛋白真核表達與原核表達如何選擇真核表達：常用酵母、昆蟲、動物和哺乳動物細(xì)胞。其優(yōu)點是根據(jù)原核生物蛋白與靶DNA的高度特異性相互作用而設(shè)計，不存在基因的非特異性激活或抑制。它可以誘導(dǎo)高達105倍的高效基因表達。可以嚴(yán)格控制基因表達。原核表達：它的優(yōu)點是可以在短時間內(nèi)獲得基因表達產(chǎn)物，而且成本相對較低。方法也簡單，可以表達的蛋白質(zhì)也很多。但缺點是表達的蛋白質(zhì)沒有經(jīng)過
					
            
				
            
								
            
					
            重組人干擾素α2b和a1b以及a2a的區(qū)別2020/11/03
            
					
            
				重組人干擾素是一種臨床應(yīng)用于治療疾病的藥物，該藥適可以治療惡性腫瘤、亞急性重癥肝炎、肝纖維化(早期肝硬化)、感染與損傷性疾病、骨髓增生異常綜合癥、病毒性疾病、系統(tǒng)性硬皮病、異位性皮炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等癥狀。重組人干擾素有a2b和a1b,a2a三種亞型,區(qū)別是比較大的,應(yīng)該引起注意.它們都是蛋白質(zhì),三級結(jié)構(gòu)相同,一級結(jié)構(gòu)有差別,這導(dǎo)致了它們有系列的差別:1、比活性:干擾素a2b和a2a的比活性(每毫克蛋白質(zhì)中所包含的干擾素的分子數(shù))是10的8次方,a1b亞型是10的7次方,這直接導(dǎo)致了前兩者與和a1
					
            
				
            
							
				
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