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M15化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞操作方法看似簡(jiǎn)單,細(xì)節(jié)很重要
M15化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌M15菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。它能表達(dá)lac阻遏蛋白，抑制T5強(qiáng)啟動(dòng)子的表達(dá)。同時(shí)，pREP4還
賦予宿主菌株卡那霉素抗性。pREP4是從pACYC改造而來(lái)的，含有p15A復(fù)制子。它能夠與所有帶ColE1復(fù)制起點(diǎn)的質(zhì)粒共存。
主要特點(diǎn)
使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108，-80℃保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
recA1和endA1突變阻止對(duì)克隆DNA的修飾或?qū)λ拗骶旧獶NA的重組，提高純化
質(zhì)粒的產(chǎn)量和質(zhì)量。
M15化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞操作方法
1、取100μl冰上融化的M15感受態(tài)細(xì)胞，加入目的DNA并用指尖輕輕敲打管底混勻(避免用槍吸打)，冰上靜置25分鐘。
2、42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3、向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。
4、5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5、將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。
M15感受態(tài)細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞使用注意事項(xiàng)
1、感受態(tài)細(xì)胞一般在冰上融化。
2、混入目的DNA時(shí)應(yīng)輕柔操作。
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