重組蛋白真核表達(dá)系統(tǒng)技術(shù)平臺的特色
重組蛋白作為生物制藥在醫(yī)學(xué)中作用顯著,一般用轉(zhuǎn)基因動物的乳腺產(chǎn)生。重組蛋白真核表達(dá)包括酵母表達(dá)系統(tǒng)、桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)、腺病毒表達(dá)系統(tǒng)等。一般可以正確折疊,包含各種修改。但是價格高,周期長。
重組蛋白真核表達(dá)系統(tǒng)技術(shù)平臺的特色
快速、highly-stringent篩選:只篩選到高表達(dá)穩(wěn)定株;4~5個月獲得穩(wěn)定高表達(dá)細(xì)胞株(常規(guī)方法要9~12個月)
高效表達(dá):*啟動子和*分泌信號肽,很容易達(dá)到30p/c/d/以上(傳統(tǒng)方法需要用藥物篩選9~11輪以上才能達(dá)到)
穩(wěn)定表達(dá):表達(dá)質(zhì)粒上的AGE穩(wěn)定子,能夠抑制染色體gene silencing,保障細(xì)胞株的長時間穩(wěn)定表達(dá)
用GS篩選:質(zhì)粒上有谷氨酰胺合成酶(GS)基因,可以做為備選篩選標(biāo)記,也可以直接用MSX加壓篩選,顯著提高重組蛋白的表達(dá)產(chǎn)率;
高產(chǎn)率:單克隆細(xì)胞株在普通搖瓶里的蛋白表達(dá)量已能達(dá)到1.5~2克/升
工藝放大優(yōu)化潛力:經(jīng)工藝放大優(yōu)化(Process Development)后,蛋白產(chǎn)量可提高5-10倍以上。本表達(dá)系統(tǒng)可容易達(dá)到3~5克/升的蛋白的產(chǎn)量。較大地節(jié)約生產(chǎn)成本。
目前的表達(dá)系統(tǒng)各有利弊,但一般理想的表達(dá)系統(tǒng)滿足以下幾點:一是特異性,不受其他內(nèi)源性因素影響,只能通過外源性無毒物激活。二是不干擾,不干擾細(xì)胞通路。以及誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)性、生物利用度、可塑性和劑量依賴性。
因此,在選擇表達(dá)系統(tǒng)時,必須充分考慮各種因素,如蛋白質(zhì)性質(zhì)、實驗條件、生產(chǎn)成本、表達(dá)水平和安全性。權(quán)衡利弊后,選擇相應(yīng)的表達(dá)系統(tǒng)。
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