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真核細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)支原體污染表現(xiàn)以及解決方式
支原體是一種特殊的微生物，在哺乳動(dòng)物（包括人類）、爬行動(dòng)物、昆蟲和植物中廣泛分布。它是小、較為簡(jiǎn)單的可自我復(fù)制的原核生物，大小僅為0.2-0.8um。支原體的基因組僅為0.58-2.20Mb，其自身生物合成能力有限，因此大部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)都要依賴于宿主。
在真核細(xì)胞培養(yǎng)過程中，支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%，因而細(xì)胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個(gè)世界性的難題。細(xì)胞培養(yǎng)中常遇見的有細(xì)菌污染、真菌污染、支原體污染、病毒污染等。說起支原體污染，估計(jì)細(xì)胞培養(yǎng)的同學(xué)就開始犯愁了，細(xì)胞培養(yǎng)的老手都知道，支原體污染非常不易察覺。有的實(shí)驗(yàn)室被支原體污染后，如果不進(jìn)行有效*的支原體清除，該實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)很難進(jìn)行下去，細(xì)胞傳代3代以后狀態(tài)就急劇下滑，無(wú)法進(jìn)行正常實(shí)驗(yàn)，有的實(shí)驗(yàn)室甚至只能指望換細(xì)胞間。
真核細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)支原體污染表現(xiàn)
細(xì)胞形態(tài)改變，一般是有梭形變成圓形，不再貼壁生長(zhǎng)，漂浮
光鏡下，可以看到細(xì)胞膜上吸附很多圓點(diǎn)，40*16倍下約有0.1mm，分布多集中于細(xì)胞核周圍和細(xì)胞邊緣，中間部位較少
消化時(shí)可以看到圓點(diǎn)從細(xì)胞膜上游離出來(lái)，很多，還會(huì)動(dòng)
細(xì)胞培養(yǎng)液變堿，有大量小黑點(diǎn)游離
解決方法
?、偬砑涌怪гw劑量的pbs或者其他平衡鹽液進(jìn)行潤(rùn)洗，然后消化
?、诔Ｒ?guī)離心，用添加抗支原體（沙星類較為有效）的*培養(yǎng)液重懸，植入新的培養(yǎng)瓶
③培養(yǎng)并且密切觀察（抗支原體推薦使用的濃度及時(shí)間如下）
恩諾沙星25μ/ml，治療時(shí)間一周；
環(huán)丙沙星10μ/ml，治療時(shí)間兩周；
司氟沙星10μ/ml，治療時(shí)間一周；
治療時(shí)間滿后撤藥換用普通雙抗培養(yǎng)基或者無(wú)抗培養(yǎng)基，另外特別說明因?yàn)橐陨纤幬锞笹+-，所以添加的時(shí)候不需要再添加常規(guī)雙抗。
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