狠狠色丁香久久综合婷婷亚洲成人福利在线-欧美日韩在线观看免费-国产99久久久久久免费看-国产欧美在线一区二区三区-欧美精品一区二区三区免费观看-国内精品99亚洲免费高清

      

        

            
		

            
			

            		

            
			  			  
            蒂科（上海）生物科技有限公司
            
			  
			  
            
				
				
			  
            

            




 
 
						
            
			
            
				
			
            
		
            
		
            
			
            
				
            
					
            
						
            細(xì)胞冷凍保存常識
            
						
            
							時間：2022-1-18閱讀：2094
						
            
						
            
							 
            1.1.欲冷凍保存的細(xì)胞應(yīng)在生長良好的指數(shù)生長期且高存活率，約為80-90%的匯合度。

            1.2.冷凍前檢測細(xì)胞是否仍保有其*性質(zhì)，例如雜交瘤細(xì)胞應(yīng)在冷凍保存前一至二日測
            試是否有抗體之產(chǎn)生。
            1.3.注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級等級，無菌且無色。4℃避光保存，勿作多次解凍。甘油亦應(yīng)為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用，因長期儲存后對細(xì)胞會有毒性。
            1.4.冷凍保存之細(xì)胞濃度： DMSO 的濃度介于 5%~20% 之間。生長培養(yǎng)液的體積應(yīng)調(diào)整以適于所用細(xì)胞保護(hù)劑的變化。
            1.4.1.正常人成纖維細(xì)胞:1-3×106 cells/ml
            1.4.2.雜交瘤細(xì)胞:1-3x106cells/ml，細(xì)胞濃度不要太高，某些雜交瘤細(xì)胞會因冷凍濃度太高而在解凍24小時后si去。
            1.4.3.貼壁的腫瘤細(xì)胞系:5-7x106cells/ml，依細(xì)胞種類而異。腺癌解凍后須較高之濃度，而HeLa只需1-3×106cells/ml。
            1.4.4.其他懸浮細(xì)胞:5-10× 106cells/ml,humanlymphocyte須至少5×106cells/ml。
            1.5.冷凍保護(hù)劑濃度為5%或10%DMSO，若是不確定細(xì)胞之冷凍條件，在做冷凍保存之同
            時，亦應(yīng)作一個對照培養(yǎng)，以防止冷凍失敗。+n6
            2.細(xì)胞冷凍保存的具體操作
            2.材料：
            2.1.生長良好之培養(yǎng)細(xì)胞
            2.2.新鮮培養(yǎng)基
            2.3.DMSO(SigmaD-2650)
            2.4.無菌塑料冷凍保存管
            2.5.0.4％ w/v臺盼藍(lán)
            2.6.血球計數(shù)盤與蓋玻片
            2.7.等速降溫機(KRYO10SeriesII)
            3.步驟：
            3.1.冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基，觀察細(xì)胞生長情形。
            3.2.配制冷凍保存溶液(使用前配制)：將DMSO加入新鮮培養(yǎng)基中，最后濃度為5-10％，
            混合均勻，置于室溫下待用。
            3.3.依細(xì)胞繼代培養(yǎng)之操作，收集培養(yǎng)之細(xì)胞，取少量細(xì)胞懸浮液(約20ul)計數(shù)細(xì)胞濃
            度及凍前存活率。
            3.4.離心，去除上清液，加入適量冷凍保存溶液，對應(yīng)細(xì)胞適合的凍存密度混合均勻，分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中，1ml/管，并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測。
            3.5.冷凍保存方法：在每一個凍存管上注明細(xì)胞系的名字，凍存者姓名和凍存時間，方便日后尋找。將一批細(xì)胞用橡皮筋捆綁住，用足夠多的棉花將凍存管包裹，包括燒杯的底座和瓶頂，保護(hù)細(xì)胞逐級冷卻，防止過快冷凍產(chǎn)生的冰晶破壞細(xì)胞狀態(tài)，放入-80℃冷凍，然后放置于液氮中。


            
							
						
            
					
            
				
            
			
            
		
            
		
	        




 
    
    		
    

		
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    

    

     
     
     
	 






	

            
	
            
		
            
			
            會員登錄
            
			X
		
            
		
            
				
            
					
					
            
						
						
            請輸入賬號
            
					
            
				
            
				
            
					
					
            
						
						
            請輸入密碼
            
					
            
				
            
				
            
					
					
            =
                       
            請輸驗證碼
            
                    
            
				
            
				
            
		
            
	
            

            


            
	
            
		
            
			
            收藏該商鋪
            
			X
		
            
		
            
			
			
            該信息已收藏！
            
			
			
            
                
            
                    
            標(biāo)簽：
            
                    
            保存成功
            (空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
            
                
            
                
            
                    
            常用：
            
                    
            
                
            
            
            
		
            
	
            

            


            
	
            
		
            
			
            提示
            
			X
		
            
		
            
			
            您的留言已提交成功！我們將在第一時間回復(fù)您~
            
		
            
	
            

            


				

		
		
            
			
            以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé)，化工儀器網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
            
			
            溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險，建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。
            
		
            
		
            
			  														撥打電話
					
										
		
            
		
		
		
		
		
		
		
        
		
		


    

	
            
		在線留言