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            蒂科(上海)生物科技有限公司

            細(xì)胞傳代培養(yǎng)小技巧

            時(shí)間:2022-1-17閱讀:1198
            1.細(xì)胞生長(zhǎng)至高密度時(shí),即須分至新的培養(yǎng)瓶中,一般稀釋比例為1:3至1:6,依細(xì)胞種類而異。
            2.材料:
            2.1.胰酶溶液(0.05%胰酶): 以10ml分裝于15ml無(wú)菌離心管中,保存于?20℃,使用前放在37℃ 水槽回溫。2.3.新鮮培養(yǎng)基2.4.無(wú)菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶生
            3.步驟:
            3.1.附著型細(xì)胞(adherentcell)
            3.1.1.吸掉舊培養(yǎng)液。
            3.1.2.用D-PBS洗滌細(xì)胞一至二次。
            3.1.3.加入胰酶溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2),37℃作用數(shù)分鐘,于倒立顯微鏡下觀察,當(dāng)細(xì)胞將要分離而呈現(xiàn)圓粒狀時(shí),吸掉或者傾倒胰酶溶液。(若沒(méi)有*去除,則在胰酶作用后,加入適量含血清之新鮮培養(yǎng)基終止胰酶作用)
            3.1.4.輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落,加入適量之新鮮培養(yǎng)基,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊,混和均勻后,依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中,以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
            3.2.懸浮型細(xì)胞(suspensioncell)
            3.2.1.吸出細(xì)胞培養(yǎng)液,放入離心管中,離心1000rpm5-10分鐘。
            3.2.2.吸掉上清液,加入適量之新鮮培養(yǎng)基,混和均勻后,依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中,以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
            3.3.雜交瘤細(xì)胞
            有些雜交瘤需培養(yǎng)三天以上才會(huì)產(chǎn)生抗體,若是更換培養(yǎng)基,則可能會(huì)失去抗體。因此繼代培養(yǎng)不需離心后更換培養(yǎng)基,直接添加新鮮培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞濃度即可。若體積太大,可傾斜放置,或分至新培養(yǎng)瓶中。

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