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EHF ELISA Kit使用說明書
（德國IBL*，貨號：RE57451）
德國IBL中國*代理商“深圳科潤達生物工程有限公司”竭誠為您服務
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EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
此酶免試劑盒可用于流行性出血熱（EHF）病人血清中抗?jié)h坦病毒IgG和IgM的定性檢測。
前言簡介
流行性出血熱（EHF）又稱腎病綜合征出血熱（HFRS），是由漢坦病毒（Hantaan type）引起的。與流行性腎病相比（因近距離接觸普馬拉病毒而被傳染），HFRS的傳染性更嚴重，一般都會伴隨有尿毒癥、呼吸麻痹和伴隨有典型休克綜合癥的出血，甚至死亡。這種疾病起初的癥狀是流行性感冒樣癥狀。HFRS起初的典型癥狀是血小板減少癥和白細胞增多癥。漢坦病毒主要分布于亞洲和巴爾干各邦地區(qū)，通過直接接觸嚙齒動物、嚙齒動物的排泄物或分泌物而傳染給人。士兵、農(nóng)民和露營者都特別容易受到危險。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
實驗原理
包被孔中包被了重組的漢灘型漢坦病毒核殼體蛋白。在檢測IgM抗體時，為了避免由IgG抗體或類風濕因子引起的非特異性因素的干擾，病人血清必須與類風濕因子IgG吸附劑一起孵育。
實驗過程孵育期間，抗重組漢坦病毒抗原的特異性抗體會結(jié)合到固相包被板上。洗板后，我們分別用過氧化酶標記的抗人IgG和IgM抗體檢測特異性的IgG和IgM。加入底物液后顯色，溶液所顯示的顏色強度與結(jié)合的抗體量成正比。之后用酶標儀讀取OD值。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
貯存及穩(wěn)定性
試劑盒應當在2~8℃運輸和儲存，避免高溫和陽光直射，沒有打開的試劑能保存到有效期。包被條在封閉的袋子內(nèi)2~8℃能保存到有效期。準備好的試劑的儲存及其穩(wěn)定性在相應章節(jié)已闡明。
開封的微孔板密封放置2-8℃下可保存至有效期。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
樣品采集和貯存EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
人血清EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
流行性出血熱（EHF）又稱腎病綜合征出血熱（HFRS），是由漢坦病毒（Hantaan type）引起的。與流行性腎病相比（因近距離接觸普馬拉病毒而被傳染），HFRS的傳染性更嚴重，一般都會伴隨有尿毒癥、呼吸麻痹和伴隨有典型休克綜合癥的出血，甚至死亡。這種疾病起初的癥狀是流行性感冒樣癥狀。HFRS起初的典型癥狀是血小板減少癥和白細胞增多癥。漢坦病毒主要分布于亞洲和巴爾干各邦地區(qū)，通過直接接觸嚙齒動物、嚙齒動物的排泄物或分泌物而傳染給人。士兵、農(nóng)民和露營者都特別容易受到危險。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
實驗原理
包被孔中包被了重組的漢灘型漢坦病毒核殼體蛋白。在檢測IgM抗體時，為了避免由IgG抗體或類風濕因子引起的非特異性因素的干擾，病人血清必須與類風濕因子IgG吸附劑一起孵育。
實驗過程孵育期間，抗重組漢坦病毒抗原的特異性抗體會結(jié)合到固相包被板上。洗板后，我們分別用過氧化酶標記的抗人IgG和IgM抗體檢測特異性的IgG和IgM。加入底物液后顯色，溶液所顯示的顏色強度與結(jié)合的抗體量成正比。之后用酶標儀讀取OD值。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
貯存及穩(wěn)定性
試劑盒應當在2~8℃運輸和儲存，避免高溫和陽光直射，沒有打開的試劑能保存到有效期。包被條在封閉的袋子內(nèi)2~8℃能保存到有效期。準備好的試劑的儲存及其穩(wěn)定性在相應章節(jié)已闡明。
開封的微孔板密封放置2-8℃下可保存至有效期。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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樣品采集和貯存EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
人血清EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
| 注意靜脈穿刺采集全血的常規(guī)注意事項。從采集到血液樣品的那一刻起到檢測時都應保持血液樣品的化學整體性。不要使用明顯溶血、黃疸的和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁，則在實驗前應當離心以除去所有的微粒物質(zhì)。此試驗要采用人血清樣本 | |||
| 儲存 | 2-8℃ | ≤-20℃ | 避免熱源和太陽直射，避免反復凍溶。 |
| 穩(wěn)定性 | 5天 | 12mon | |
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試劑盒成分EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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| 規(guī)格 | 符號 | 成分 |
| 1 x 12 x 8 | MTP | 微孔反應板 即用,可分拆.預包被有重組漢灘型抗原（strain: CG 76-118） |
| 1 x 750 µL | ANTI IgG CONJ CONC | 酶聯(lián)物（20倍濃縮） 過氧化酶標記抗IgG |
| 1 x 750 µL | ANTI IgM CONJ CONC | 酶聯(lián)物（20倍濃縮） 過氧化酶標記抗IgM |
| 1 x 1.5 mL | CONTROL + IgG | 陽性質(zhì)控IgG 即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑 |
| 1 x 1.5 mL | REFCONTROL IgG | 參考對照質(zhì)控IgG 即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑 |
| 1 x 1.5 mL | CONTROL + IgM | 陽性質(zhì)控IgM 即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑 |
| 1 x 15 mL | DILBUF CONC | 樣品稀釋緩沖液（20倍濃縮） 紅色瓶蓋.內(nèi)含:PBS，pH7.4，清潔劑和0.01%的硫柳汞 |
| 1 x 1.5 mL | REFCONTROL IgM | 參考對照質(zhì)控IgM 即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑 |
| 1 x 1.9 mL | CONTROL- | 陰性質(zhì)控 即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑 |
| 1 x 100 mL | WASHBUF CONC | 洗滌液（10倍濃縮） 內(nèi)含:PBS緩沖液 |
| 1 x 1.5 mL | RE-AB | 類風濕因子吸附劑 即用.內(nèi)含抗-人IgG, 穩(wěn)定劑,防腐劑 |
| 1 x 12 mL | TMB SUBS | TMB底物液 即用.內(nèi)含:TMB |
| 1 x 12 mL | TMB STOP | TMB終止液 即用.內(nèi)含0.5 M 硫酸 |
| 1 x | FOIL | 膠粘薄膜 |
EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
實驗做需器材但試劑盒沒提供EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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1、微移液管 體積（5; 20; 50; 100; 200; 1000 µL）
2、渦旋混合器
3、保溫箱, 37°C
4、試管（用于樣品稀釋）
5、8道微量移液器
6、洗瓶,自動或半自動洗板機
7、酶標儀
8、雙蒸水或去離子水
9、吸水紙,吸嘴,計時器
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實驗前準備EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
實驗前將試劑盒平衡至室溫（18-25°C）.含結(jié)晶的緩沖濃縮液可在37°C下迅速將其溶解.實驗前將其冷卻至至室溫（18-25°C）
EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
稀釋濃宿成分的準備（以測32孔為例）EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
提示:實驗前取所需量試劑,并迅速用于稀釋.
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實驗前將試劑盒平衡至室溫（18-25°C）.含結(jié)晶的緩沖濃縮液可在37°C下迅速將其溶解.實驗前將其冷卻至至室溫（18-25°C）
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稀釋濃宿成分的準備（以測32孔為例）EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
提示:實驗前取所需量試劑,并迅速用于稀釋.
| 濃縮液 （示例） | 組分 | 體積 | 稀釋液 | 比例 | 備注 | 存儲 | 穩(wěn)定性 |
| 3mL | DILBUF CONC | 57mL | 去離子水 | 1:20 | 充分混勻 | 2-8°C | 1周 |
| 10 mL | WASHBUF CONC | 90 mL | 去離子水 | 1:10 | 充分混勻 | 2-8°C | 8周 |
| 200 µL | ANTI IgG CONJ CONC OR ANTI IgM CONJ CONC | 3.8 mL | 稀釋洗滌液 | 1:20 | 充分混勻 | - | 實驗結(jié)束后倒掉 |
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樣品稀釋EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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| | 稀釋 | | 比例 | 備注 | | 穩(wěn)定性 |
| IgG樣品 | 常規(guī) | 稀釋樣品稀釋液 | 1:201 | 10 µL+2000 µL | 2-8°C | 6周 |
| IgM樣品 | 常規(guī) | 稀釋樣品稀釋液 | 1:201 | 10 µL+2000 µL （加15 µL類風濕因子吸附劑至250 µL稀釋血清樣品, 18-25°C孵育30分鐘） | 2-8°C | 6周 |
提示:未稀釋樣品可于-20°C下保持數(shù)月
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實驗步驟EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
1.將100μl即用型陽性質(zhì)控、陰性質(zhì)控、參考對照質(zhì)控和稀釋血清樣品（如是IgM樣品,需用類風濕因子吸附劑前處理）加入到相應的微孔中。
2.膠粘薄膜蓋板，37℃下溫育45分鐘。
3.移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應液.每孔加入300μl稀釋洗滌液，重復洗板4次，在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
4.每孔中加入100μl稀釋酶聯(lián)物（IgG 或IgM）
5.膠粘薄膜蓋板。37℃下溫育45分鐘.
6.移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應液.每孔加入300μl稀釋洗滌液，重復洗板4次，在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
7.加底物液和終止液,建議用8道微移液器,保證加液相等的時間間隔。避免產(chǎn)生氣泡。
8.每孔中加入100μl TMB底物液
9.室溫（18-25°C）溫育10分鐘
10.每孔中加入100μl終止液終止底物液反應。
11.20分鐘內(nèi)于酶標儀450nm處讀取OD值。（參考波長：650nm）
EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
結(jié)果計算EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
用病人樣品的OD值比上參考對照質(zhì)控的OD值計算檢驗結(jié)果
A病人樣品/ A參考對照質(zhì)控= Q
EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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實驗步驟EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
1.將100μl即用型陽性質(zhì)控、陰性質(zhì)控、參考對照質(zhì)控和稀釋血清樣品（如是IgM樣品,需用類風濕因子吸附劑前處理）加入到相應的微孔中。
2.膠粘薄膜蓋板，37℃下溫育45分鐘。
3.移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應液.每孔加入300μl稀釋洗滌液，重復洗板4次，在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
4.每孔中加入100μl稀釋酶聯(lián)物（IgG 或IgM）
5.膠粘薄膜蓋板。37℃下溫育45分鐘.
6.移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應液.每孔加入300μl稀釋洗滌液，重復洗板4次，在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
7.加底物液和終止液,建議用8道微移液器,保證加液相等的時間間隔。避免產(chǎn)生氣泡。
8.每孔中加入100μl TMB底物液
9.室溫（18-25°C）溫育10分鐘
10.每孔中加入100μl終止液終止底物液反應。
11.20分鐘內(nèi)于酶標儀450nm處讀取OD值。（參考波長：650nm）
EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
結(jié)果計算EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
用病人樣品的OD值比上參考對照質(zhì)控的OD值計算檢驗結(jié)果
A病人樣品/ A參考對照質(zhì)控= Q
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IgG抗體：EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
| Q＜1 | 陰性：沒有檢測到抗?jié)h灘型漢坦病毒IgG抗體 |
| 1≤Q≤1.5 | 可疑灰色區(qū)域，不能明確說明結(jié)果，10天之后應當對疾病的病程進行再次檢測。如果疑似病人感染了漢坦病毒，我們建議您對檢測的樣品也檢測下漢灘病毒（Hantaan）IgM抗體或檢測下普馬拉（Puumala）病毒抗體。 |
| Q＞1.5 | 陽性：檢測到抗?jié)h灘病毒特異性IgG抗體 |
EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
IgM抗體：EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
IgM抗體：EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
| Q＜1 | 陰性：沒有檢測到抗?jié)h灘型漢坦病毒IgM抗體 |
| 1≤Q≤2 | 可疑灰色區(qū)域，不能明確說明結(jié)果，10天之后應當對疾病的病程進行再次檢測。如果疑似病人感染了漢灘病毒，我們建議您對檢測的樣品也檢測下普馬拉病毒（Puumala）抗體。 |
| Q＞2 | 陽性：檢測到抗?jié)h坦病毒特異性IgM抗體 |
本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。
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