檢測(cè)樣品包括：
| 樣品 | 原奶 | 原奶*2 | 原奶*5 | 原奶*10 | 100ppm標(biāo)品 | |||||
| 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | ||||||
| 編號(hào) | A | B | C | D | E | F | G | H | I | J |
| A空白 | B空白 | C空白 | D空白 | E空白 | F空白 | G空白 | H空白 | I空白 | J空白 | |
每個(gè)樣品分別按照以下步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：
| 添加溶液 | 添加體積數(shù) | |
| A-J 樣品 | A-J 空白 | |
| 樣品前處理后的上清液 | 0.50 mL | 0.50 mL |
| 乙酸鈉緩沖液（0.2 M） | 0.10 mL | 0.10 mL |
| 去離子水 | - | 0.05 mL |
| 瓶1（β-半乳糖苷酶） | 0.05 mL | - |
| 漩渦混合，并于40℃水浴中反應(yīng)1小時(shí)，然后分別加入以下溶液，每加一個(gè)溶液，要蓋上螺帽進(jìn)行漩渦混合。 | ||
| TEA緩沖液（1 M）/硫酸鎂（10 mM） | 0.50 mL | 0.50 mL |
| 氫氧化鈉溶液（0.33 M） | 0.05 mL | 0.05 mL |
| 辛醇 | 0.01 mL | 0.01 mL |
| 瓶2懸浮液（葡萄糖氧化酶和過(guò)氧化氫酶） | 0.05 mL | 0.05 mL |
| 30%過(guò)氧化氫 | 0.02 mL | 0.02 mL |
| 加完后蓋上螺帽于40℃水浴中反應(yīng)15min，15min后于13000rmp離心10min，取上清液作為酶測(cè)試反應(yīng)。注意：加入過(guò)氧化氫后不管是樣品還是樣品空白會(huì)產(chǎn)生氣泡，無(wú)氣泡產(chǎn)生說(shuō)明實(shí)驗(yàn)可能失敗。 | ||
三、酶測(cè)試反應(yīng)
| 添加溶液 | 添加體積數(shù) | |
| A-J 樣品 | A-J 空白 | |
| 樣品酶解實(shí)驗(yàn)后的上清液 | 1.00mL | 1.00 mL |
| 瓶3緩沖液 | 0.05 mL | 0.05 mL |
| 瓶4稀釋液（NADP+/ATP) | 0.05 mL | 0.05 mL |
| 將上述溶液分別加入一次性的比色皿中，每加一個(gè)溶液蓋上比色皿蓋子手動(dòng)搖晃均勻，然后反應(yīng)3min，在340nm處檢測(cè)紫外吸光度，讀數(shù)為A1，然后加入以下溶液進(jìn)一步反應(yīng)。 | ||
| 瓶5懸浮液（HK/G-6-PDH) | 0.02 mL | 0.02 mL |
| 瓶6懸浮液（6-PGDH) | 0.02 mL | 0.02 mL |
| 每加一個(gè)溶液蓋上比色皿蓋子手動(dòng)搖晃均勻，然后反應(yīng)10min，在340nm處檢測(cè)紫外吸光度，讀數(shù)為A2，然后加入以下溶液進(jìn)一步反應(yīng)。 | ||
| 瓶7懸浮液（PGI) | 0.02 mL | 0.02 mL |
| 加入以上溶液手動(dòng)搖晃均勻，然后反應(yīng)15min，在340nm處檢測(cè)紫外吸光度，讀數(shù)為A3。注意：在檢測(cè)紫外吸光度A1-A3過(guò)程中，吸光度的大小會(huì)在一定范圍內(nèi)波動(dòng)，波動(dòng)過(guò)大或者不穩(wěn)定請(qǐng)排查各個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟，找出問(wèn)題。 | ||
四、數(shù)據(jù)分析
| 樣品 | 原奶 | 原奶*2 | 原奶*5 | 原奶*10 | 100ppm標(biāo)品 | |||||
| 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | ||||||
| 編號(hào) | A | B | C | D | E | F | G | H | I | J |
| 計(jì)算終濃度（ppm） | 474.6 | 472.2 | 484.8 | 487.4 | 484 | 499.7 | 493.7 | 500.9 | 97.3 | 101.6 |
| 平均值 | 473.4 | 486.1 | 491.8 | 497.3 | 99.5 | |||||
| 結(jié)論 | A3-A2＞1.5，需對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)粰z測(cè)值偏低 | 樣品稀釋2倍，5倍，10倍后通過(guò)Megazyme Mega-CalcTM進(jìn)行計(jì)算，換算為原奶含乳果糖濃度，相互比較，誤差都在2%以?xún)?nèi)，符合檢測(cè)要求。 | 平行樣檢測(cè)的數(shù)值與標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度相符，平行樣差值低于1%。 | |||||||
產(chǎn)品信息
| 貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
| CFHN-K-LACTUL | 乳果糖分析試劑盒 | 50 assays | 3104 |
| CFEQ-4-120084-0250 | 磷酸氫二鈉，ACS， | 250g | 436 |
| CFEQ-4-120023-0250 | 磷酸二氫鈉一水化合物，ACS，Reag. Ph. Eur.，98.0-102.0% | 250g | 210 |
| CFEQ-4-198525-1000 | 無(wú)水硫酸鎂，≥98.0%，for analysis，粉末狀 | 1kg | 463 |
| CFEQ-4-198528-0500 | 無(wú)水乙酸鈉，(Reag. Ph. Eur.) ACS，≥99.0% | 500g | 490 |
| CFEQ-4-111615-0500 | 三乙醇胺，≥99.0% | 500ml | 144 |
| CFEQ-4-120033-0250 | 亞鐵氰化鉀三水合物，for analysis，98.0% | 250g | 353 |
| CFEQ-4-120050-0250 | 硫酸鋅七水化合物，ACS，ISO， | 250g | 419 |
| CFEQ-4-120045-0500 | 氫氧化鈉，for analysis ，≥ 97.0% | 500g | 342 |
| CFEQ-4-531046-0005 | 1-辛醇，≥98.0% | 5mL | 88 |
| CFEQ-4-110013-0500 | 雙氧水（過(guò)氧化氫）， 27% w/w | 500mL | 275 |
| AGEQ-2722120 | CUVETTES 1.6ml 一次性UV 比色皿，半微量池、100/盒 | 100/盒 | 430 |
| AGEQ-2722110 | CUVETTES 4.0ml 一次性UV 比色皿、100/盒 | 100/盒 | 380 |
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