過(guò)氧化氫（H2O2）檢測(cè)試劑盒(硫酸鈦比色法)
一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
過(guò)氧化氫(H2O2)是生物體內(nèi)最常見的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化產(chǎn)生，由CAT和POD等催化降解，H2O2不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉(zhuǎn)化的樞紐。生命體內(nèi)積累的H2O2是由一些氧化物催化超氧陰離子發(fā)生氧化還原反應(yīng)而形成，H2O2相對(duì)超氧陰離子性質(zhì)穩(wěn)定，但其存在可以直接或間接導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化損害，加速細(xì)胞的衰老和解體，H2O2也是許多氧化應(yīng)激反應(yīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。
雅吉生物過(guò)氧化氫(H2O2檢測(cè)試劑盒(硫酸鈦比色法)其檢測(cè)原理是H2O2與硫酸鈦反應(yīng)生成的過(guò)氧化物-鈦復(fù)合物黃色沉淀，溶解于強(qiáng)酸中，其黃色深淺與過(guò)氧化氫濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，可通過(guò)比色法檢測(cè)412nm處吸光度，主要用于檢測(cè)植物組織、血清、血漿等樣品中過(guò)氧化氫(H2O2)含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域不適用于臨床診斷或其他用途。
二、產(chǎn)品組成：
名稱 | 50T | Storage |
試劑(A):H2O2基液 | 1ml | 4℃ |
試劑(B):堿性基液 | 10.5ml | RT |
試劑(C):硫酸鈦 | 0.3g | RT |
試劑(D):酸性基液 | 100ml | RT |
三、自備材料：
1、蒸餾水、丙酮
2、勻漿器或研缽
3、低溫離心機(jī)
4、分光光度計(jì)、比色杯
四、操作步驟(僅供參考)：
1、準(zhǔn)備樣品︰
①植物樣品∶取正?；蚰婢诚碌男迈r植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取5g ，加入5ml預(yù)冷的丙酮，在冰浴條件下迅速勻漿或研磨，4℃ 12000g離心20min，收集上清液，測(cè)量提取液總體積，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測(cè)定，4℃保存，用于過(guò)氧化氫的檢測(cè)。
③高活性樣品∶如果樣品中含有較高濃度的過(guò)氧化氫，可以使用丙酮進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>
2、配制10mM H2O2標(biāo)準(zhǔn)溶液∶由于過(guò)氧化氫不是非常穩(wěn)定，使用前需自行測(cè)定過(guò)氧化氫的實(shí)際濃度，該試劑盒提供的H2O2基液的H2O2濃度約為1M，用蒸餾水稀釋100倍，使H2O2濃度約為10mM，蒸餾水調(diào)零，分光光度計(jì)測(cè)定A240，根據(jù)公式H2O2濃度(mM)=22.94×A240計(jì)算出H2O2基液中H2O2的實(shí)際濃度，再用丙酮稀釋H2O2基液配制10mM H2O2丙酮標(biāo)準(zhǔn)溶液(一般情況下新配制的10mM H2O2基液A240為0.4~0.45，3個(gè)月以后A240為0.35~0.42)。
按下表依次稀釋(常用濃度0.3-3mM,即1~5號(hào))∶
加入物（ml） | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
丙酮-H2O標(biāo)準(zhǔn)(10mM) | 0.03 | 0.05 | 0.08 | 0.1 | 0.3 | 0.5 | 0.8 |
預(yù)冷丙酮 | 0.97 | 0.95 | 0.92 | 0.9 | 0.7 | 0.5 | 0.2 |
H2O2濃度（mM） | 0.3 | 0.5 | 0.8 | 1 | 3 | 5 | 8 |
3、配制硫酸鈦溶液∶0.3g 硫酸鈦加入 6ml蒸餾水中，即為5%硫酸鈦溶液，4C保存。
4、H2O2加樣∶按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡;如果樣品中的H2O2濃度過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行管。
加入物（ml） | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測(cè)定管 |
預(yù)冷丙酮 | 1 | — | — |
系列丙酮-H2O2標(biāo)準(zhǔn)(1~7號(hào)) | — | 1 | — |
代測(cè)樣品 | — | — | 1 |
堿性基液(直接加入到溶液) | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
硫酸鈦溶液（直接加入到溶液) | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
加入堿性基液、硫酸鈦溶液時(shí)，應(yīng)直接加至溶液中，不要粘到管壁 | |||
5、H2O2測(cè)定∶混勻，室溫放置5min ， 12000g離心15min，棄上清液，留取沉淀，如有必要可加入預(yù)冷丙酮反復(fù)洗滌沉淀物，向各管的沉淀中加入2ml酸性基液，搖動(dòng)，使沉淀溶解;比色杯光徑1cm，空白管調(diào)零，分光光度計(jì)測(cè)定412nm處各標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管的吸光度，如果沒有分光光度計(jì)，亦可用酶標(biāo)儀檢測(cè)。
五、計(jì)算:以系列丙酮-H2O2標(biāo)準(zhǔn)(0.3、0.5、0.8、1、3、5、8 mM)為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程;以測(cè)定管吸光度代入回歸方程求得待測(cè)樣品中H2O2的濃度。
組織樣品H2O2(mmol/g)=(C0×VT×N)/m
液體樣品H2O2 (mmol/L)=C0×N
式中:
Co=根據(jù)待測(cè)樣品的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線求得H2O2濃度(mM)
VT=待測(cè)樣品的總體積(L)
m=樣品質(zhì)量(g)
N=樣本稀釋倍數(shù)
六、注意事項(xiàng):
1、該試劑盒亦可用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，但檢測(cè)的樣本數(shù)相應(yīng)增加。
2、加入堿性基液、硫酸鈦溶液時(shí)，應(yīng)直接加入至溶液中，不要粘到管壁。
3、過(guò)氧化物-鈦復(fù)合物黃色沉淀溶解于酸性基液時(shí)需要一段時(shí)間，需溶解，否則有可能影響測(cè)定結(jié)果。
4、H2O2基液和堿性基液應(yīng)嚴(yán)格密閉保存，避免揮發(fā)，否則效率會(huì)下降。
5、H2O2基液和酸性基液有一定腐蝕性，請(qǐng)小心操作。
6、硫酸鈦溶解于水后應(yīng)盡早使用，如暫時(shí)不用，可短期放置4℃冰箱保存﹔亦可用分析天平稱取一定量的粉劑，配置5%的濃度即可。
7、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
七、 有效期∶12個(gè)月有效。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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