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            常達(dá)恩生物科技(上海)有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第2年

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            常達(dá)恩推薦-大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF)elisa檢測(cè)試劑盒

            時(shí)間:2025/2/21閱讀:263
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            使用目的:

            本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF)含量

            實(shí)驗(yàn)原理

            本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF)水平。用純化的大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF),再與HRP標(biāo)記的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF)濃度。

            試劑盒組成

            1

            30倍濃縮洗滌液

            20ml×1

            7

            終止液

            6ml×1

            2

            酶標(biāo)試劑

            6ml×1

            8

            標(biāo)準(zhǔn)品(320pg/ml

            0.5ml×1

            3

            標(biāo)包被

            12孔×8

            9

            標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            1.5ml×1

            4

            樣品稀釋液

            6ml×1

            10

            說(shuō)明書(shū)

            1

            5

            顯色劑A

            6ml×1

            11

            封板膜

            2

            6

            顯色劑B

            6ml×1/

            12

            密封袋

            1個(gè)

            標(biāo)本要求

            1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

            2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

            操作步驟

            1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

            160pg/ml

            5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

            150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            80pg/ml

            4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

            150μl5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            40pg/ml

            3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

            150μl4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            20pg/ml

            2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

            150μl3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            10pg/ml

            1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

            150μl2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

            2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

            3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

            4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

            5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

            6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外

            7. 溫育:操作同3。

            8. 洗滌:操作同5。

            9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

            10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)

            11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

            操作程序總結(jié):

            常達(dá)恩推薦-大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF)elisa檢測(cè)試劑盒


            計(jì)算

            以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。



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