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PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑

MCE 國(guó)際站：PolyFast Transfection Reagent

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件： -20℃ 兩年避免反復(fù)凍融

簡(jiǎn)介：MCE PolyFast Transfection Reagent 采用非脂質(zhì)體陽離子聚合物為主要成分，可高效地對(duì) DNA、RNA 進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

概述：MCE PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑采用非脂質(zhì)體陽離子聚合物為主要成分，適用于 DNA、RNA 的轉(zhuǎn)染。其具體原理為外源 DNA、RNA 可以與轉(zhuǎn)染試劑形成穩(wěn)定復(fù)合物，通過胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞，隨后在胞質(zhì)中釋放。PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑對(duì)多種常見細(xì)胞具有高水平轉(zhuǎn)染效率，對(duì)原代細(xì)胞和難轉(zhuǎn)染細(xì)胞也具有較好的效果，高效低毒、操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好

描述：

MCE PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑由陽離子聚合物組成，可將核酸（DNA 或 RNA）引入真核細(xì)胞。在基于聚合物的轉(zhuǎn)染中，外源 DNA 與陽離子聚合物形成復(fù)合物，通過內(nèi)吞作用進(jìn)入宿主細(xì)胞。PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑對(duì)許多細(xì)胞類型（包括一些難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞）具有高效、低毒的轉(zhuǎn)染效果。

操作說明：1. 準(zhǔn)備待轉(zhuǎn)染細(xì)胞（以 6 孔板為例）1.1 提前一天接種細(xì)胞，至細(xì)胞密度達(dá)到 70-90% 進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。注：細(xì)胞狀態(tài)會(huì)極大影響轉(zhuǎn)染效率，待轉(zhuǎn)染細(xì)胞應(yīng)處于良好生長(zhǎng)狀態(tài)，建議使用生長(zhǎng)處于指數(shù)期、存活率大于 90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。1.2 吸去原培養(yǎng)基，用 1× PBS 洗滌細(xì)胞 2-3 次，加入 900 μL 新鮮無血清培養(yǎng)基。2. 準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染試劑/DNA 復(fù)合物2.1 對(duì) PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行稀釋，對(duì)于待轉(zhuǎn)染 6 孔板中的每孔細(xì)胞，取 50 μL 無血清培養(yǎng)基與 3 μL PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑混合，用槍輕輕吹打混勻，室溫反應(yīng) 5 分鐘。2.2 參照表 1 對(duì) DNA 進(jìn)行稀釋，對(duì)于待轉(zhuǎn)染 6 孔板中的每孔細(xì)胞，取 50 μL 無血清培養(yǎng)基與 1 μg DNA 混合，用槍輕輕吹打混勻，室溫反應(yīng) 5 分鐘。2.3 將上述稀釋好的 PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑與 DNA 輕輕混勻，得到 PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑/DNA 復(fù)合物，室溫孵育 15 分鐘。3. 加入 PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑/DNA 復(fù)合物至細(xì)胞將上述 PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑/DNA 復(fù)合物加入每孔細(xì)胞（復(fù)合物占每孔總體積約 1/10），輕輕混勻后于 37℃ 孵育 24-48 小時(shí)。必要時(shí)，可在轉(zhuǎn)染 6 小時(shí)后更換新鮮有血清培養(yǎng)基注：1） 通常情況下，DNA (μg) 和 PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑 (μL) 的用量比例為 1:3。如有必要，可在 1:1-1:5 的范圍內(nèi)調(diào)整以優(yōu)化轉(zhuǎn)染效果。最佳轉(zhuǎn)染條件因不同的細(xì)胞類型和培養(yǎng)條件而有所區(qū)別，轉(zhuǎn)染前，可做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索最佳轉(zhuǎn)染比例。2） RNA 轉(zhuǎn)染操作可參考 DNA 轉(zhuǎn)染方法進(jìn)行。4. 分析轉(zhuǎn)染細(xì)胞轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng) 24-48 小時(shí)后，可根據(jù)實(shí)際情況用熒光檢測(cè)法、Western Blot、ELISA 等檢測(cè)轉(zhuǎn)染效果，或加入篩選藥物進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選

注意事項(xiàng)：1. 轉(zhuǎn)染時(shí)，應(yīng)選用高純度、無菌、無污染的 DNA/RNA。2. 細(xì)胞狀態(tài)會(huì)極大影響轉(zhuǎn)染效率，待轉(zhuǎn)染細(xì)胞應(yīng)處于良好生長(zhǎng)狀態(tài)。3. 血清對(duì) PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑/DNA 復(fù)合物的形成有一定影響，建議用無血清培養(yǎng)基稀釋 PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑和 DNA。4. 轉(zhuǎn)染過程中，抗生素的存在可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低及細(xì)胞毒性，不建議在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中添加抗生素。5. 影響轉(zhuǎn)染效率的因素有很多，如細(xì)胞類型、細(xì)胞狀態(tài)及密度、DNA/RNA 質(zhì)量及濃度、PolyFast 轉(zhuǎn)染試劑與 DNA/RNA 比例等，應(yīng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)摸索最佳轉(zhuǎn)染條件。6. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。7. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

銷售產(chǎn)品：8-Gingerol  | Sulfamethoxazole  | Siponimod  | RS 09  | Sodium zirconium cyclosilicate  | Motixafortide  | (±)-N-3-Benzylnirvanol  | Phosphorylcholine  | SPDB  | Limonin

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