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雙熒光素酶試劑盒

MCE 國際站：Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件： -20℃ 一年避光保存，避免反復(fù)凍融

簡介：MCE Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit 含有高純度的 D-熒光素、腔腸素以及比例優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，實現(xiàn)哺乳動物細(xì)胞雙螢光素酶報告基因檢測。

概述：雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)包括螢火蟲熒光素酶 (Firefly Luciferase，firLuc)和海腎熒光素酶 (Renilla Luciferase，rLuc)。在ATP和熒光素酶存在下，D-熒光素 (D-Luciferin)能夠被氧化，發(fā)出波長為 570 nm 左右的生物螢光 (bioluminescence) (圖1)。當(dāng)熒光素過量時，發(fā)光亮度與熒光素酶濃度呈正相關(guān)，廣泛用于熒光素酶報告基因的檢測。在 O2 存在條件下，海腎熒光素酶 (Renilla Luciferase)可以將腔腸熒光素(coelenterazine)氧化成腔腸酰胺 (coelenteramide)，并發(fā)出波長為 480 nm 左右的生物螢光 (圖2)。海腎熒光素酶作為雙熒光素酶報告基因的內(nèi)參，消除了細(xì)胞生長狀態(tài)、數(shù)量、轉(zhuǎn)染效率等差異的影響，使得檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性更高。本試劑盒中含有高純度的D-熒光素、腔腸素以及比例優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液。在雙熒光素酶反應(yīng)中，首先用 Firefly Luciferase Working Solution (含D-熒光素)檢測螢火蟲熒光素酶信號；隨后，直接加入 Renilla Luciferase Working Solution (含腔腸素)，將螢火蟲熒光素酶的信號猝滅，同時產(chǎn)生海腎熒光素酶信號。本試劑盒具有操作簡單、檢測快捷、靈敏度高等優(yōu)點。

描述：

MCE 海腎-螢火蟲熒光素酶雙聯(lián)檢測試劑盒含有高純度 D-熒光素、腔腸素和專有反應(yīng)緩沖液。首先將螢火蟲熒光素酶工作液加入樣品中。該試劑含有可產(chǎn)生螢火蟲熒光素酶生物發(fā)光的 D-熒光素。接下來，將海腎熒光素酶工作液加入同一樣品中。它會猝滅螢火蟲熒光素酶生物發(fā)光并產(chǎn)生海腎熒光素酶生物發(fā)光。兩種反應(yīng)的光產(chǎn)生量均可方便地在光度計上測量。

操作說明：1. 配制試劑1.1 Lysis Buffer (1×) 的配置將 Lysis Buffer (5×) 用超純水稀釋 5 倍，配置成 1× 工作液。1.2 螢火蟲熒光素酶工作液 (Firefly Luciferase Working Solution)的配置將 Firefly Luciferase Substrate 干粉管短暫離心后開蓋，加入 1 mL Firefly Luciferase Buffer 將其全部溶解并混合均勻，然后將全部溶液移入剩余的 9 mL Firefly Luciferase Buffer 中，混勻。1.3 海腎熒光素酶工作液 (Renilla Luciferase Working Solution)的配置將 Renilla Luciferase Substrate 短暫離心后開蓋，加入 1 mL Renilla Luciferase Buffer 混合均勻，然后將全部溶液移入剩余的 9 mL Renilla Luciferase Buffer 中，混勻。注1：所有試劑使用前需平衡至室溫。注2：螢火蟲熒光素酶、海腎熒光素酶工作液配制完成后，分裝、避光保存，避免反復(fù)凍融，-80℃可保存一年，-20℃可保存一個月。2. 裂解細(xì)胞2.1 細(xì)胞裂解時密度應(yīng)小于 95%，細(xì)胞生長過密，易導(dǎo)致裂解不充分。質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)、病毒感染細(xì)胞后，需培養(yǎng)一段時間 (一般 48 小時)使熒光素酶充分表達(dá)。2.2 去除培養(yǎng)基，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗 1 遍，注意不要將細(xì)胞吹起。2.3 加入適量的 1× Lysis Buffer，用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。2.4 將細(xì)胞培養(yǎng)板置于搖床上，室溫、輕晃孵育 15 分鐘。注：細(xì)胞數(shù)量較高時，可適當(dāng)加大裂解液用量、延長裂解時間。2.5 將裂解物轉(zhuǎn)移到新的離心管中，4℃、12,000 rpm 離心 10 分鐘，取上清備用。3. 熒光檢測3.1 取 20 μL 細(xì)胞裂解物，加至 96 孔黑色不透底酶標(biāo)板中。3.2 檢測螢火蟲熒光素酶信號取 100 μL 平衡至室溫的螢火蟲熒光素酶工作液加至上述反應(yīng)板中，混勻后，用酶標(biāo)儀測定螢火蟲熒光素酶信號。3.3 檢測海腎熒光素酶信號取 100 μL 平衡至室溫的海腎熒光素酶工作液加至上述反應(yīng)板中，混勻后，用酶標(biāo)儀測定海腎熒光素酶信號。3.4 結(jié)果分析在以海腎螢光素酶為內(nèi)參的情況下，用螢火蟲螢光素酶所得發(fā)光值除以海腎螢光素酶所得發(fā)光值。根據(jù)得到的比值來比較不同樣品間目的報告基因的激活程度。注：為了確保實驗結(jié)果準(zhǔn)確性，螢火蟲熒光素酶 (fLuc) 和海腎熒光素酶 (rLuc) 的發(fā)光值均應(yīng)為相對發(fā)光值 (RLU, relative light unit)。

注意事項：1. Luminometer 發(fā)光計或者多功能酶標(biāo)儀或者其他能夠檢測生物發(fā)光的儀器均適用于此試劑盒。2. 螢火蟲熒光素酶、海腎熒光素酶工作液配制完成后，分裝、避光保存，避免反復(fù)凍融，-80℃ 可保存一年，-20℃ 可保存一個月。3. 發(fā)光強(qiáng)度以及衰減速率取決于熒光素酶的反應(yīng)速率。溫度對酶反應(yīng)速率有直接影響，兩種螢光素酶活性的最適溫度約為室溫 (20-25℃)，檢測時請將樣品與反應(yīng)試劑平衡至室溫。4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

銷售產(chǎn)品：Dehydrocorydaline (chloride)  | (20R)-Ginsenoside Rg3  | Maribavir  | Pirarubicin  | Xanthurenic acid  | Serplulimab  | Fingolimod  | LCL521 dihydrochloride  | Rivaroxaban  | BML-284

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