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2021
09-07

什么是原代細(xì)胞、細(xì)胞株、細(xì)胞系？
原代細(xì)胞(primarycell)是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞，稱為原代細(xì)胞。一般認(rèn)為，培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)...
2021
09-07

腫瘤原代細(xì)胞鑒定技術(shù)
一、形態(tài)學(xué)鑒定1.在倒置顯微鏡中直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征2.細(xì)胞染色檢查：a)將無菌玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，加細(xì)胞懸液后培養(yǎng)；b)待細(xì)胞長滿玻片后取出，用PBS清洗，之后放于載玻片上，待其自然干燥；c...
2021
09-07

原代細(xì)胞計(jì)數(shù)技術(shù)
1、準(zhǔn)備計(jì)數(shù)板：用酒精清潔計(jì)數(shù)板及專用蓋玻片，然后輕輕拭干。2、制備細(xì)胞懸液：用消化液分散單層培養(yǎng)細(xì)胞或直接收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，制成單個(gè)細(xì)胞懸液。要求細(xì)胞密度不低于104/ml，若細(xì)胞數(shù)很少，應(yīng)將懸液離...
2021
09-07

原代細(xì)胞染色技術(shù)
一．臺盼藍(lán)染色（1）制備單個(gè)細(xì)胞懸液，并作適當(dāng)稀釋（106細(xì)胞/ml)。（2）染色：取9滴細(xì)胞懸液移入小試管中，加一滴0.4%臺盼藍(lán)溶液，混勻。（3）計(jì)數(shù)：在3分鐘內(nèi)，用血球計(jì)數(shù)板分別計(jì)數(shù)活細(xì)胞和死細(xì)...
2021
09-07

原代細(xì)胞復(fù)蘇技術(shù)
1、取出細(xì)胞，迅速放入37℃溫水中快速解凍。2、吸出細(xì)胞懸液，并加10倍以上培養(yǎng)液。3、1000r/分鐘離心5分鐘，去除上清。4、用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后接種培養(yǎng)瓶，放入37℃CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。鏡檢細(xì)胞...
2021
09-06

原代細(xì)胞凍存技術(shù)
1、選用生長情況好，數(shù)量較多的原代細(xì)胞，凍存前一天換液一次。2、貼壁細(xì)胞需用0.25％胰酶常規(guī)消化將細(xì)胞消化下來，將細(xì)胞懸液收集至離心管中。3、1000rpm離心5分鐘，棄上清液。4、沉淀加含DMSO...
2021
09-06

原代細(xì)胞無血清培養(yǎng)技術(shù)
1、棄去培養(yǎng)基廢液。2、消化：加入1ml0.125％胰酶溶液，轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶使酶液浸沒瓶底，溫浴消化2-3分鐘。3、終止：用無血清培養(yǎng)基終止酶反應(yīng)。4、離心：收集中和了的培養(yǎng)液，于15ml的離心管中100...
2021
09-06

原代細(xì)胞傳代技術(shù)
一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀察，發(fā)...
2021
09-06

原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
一、組織塊直接培養(yǎng)法1、取材，用Hank's液洗滌三次，并剔除脂肪，結(jié)締組織，血液等雜物。2、用手術(shù)剪將組織剪切成1mm3左右的小塊，再用Hank's液洗三次。3、將組織塊轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶，并貼附于瓶底面...
2021
09-06

原代細(xì)胞鑒定技術(shù)
一、形態(tài)學(xué)鑒定1.在倒置顯微鏡中直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征2.細(xì)胞染色檢查：a)將無菌玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，加細(xì)胞懸液后培養(yǎng)；b)待細(xì)胞長滿玻片后取出，用PBS清洗，之后放于載玻片上，待其自然干燥；c...
2021
08-30

原代細(xì)胞分離技術(shù)
取人或動(dòng)物體內(nèi)（或胚胎）的組織，將其剪碎至1mm3的組織塊，再采用的如下方法進(jìn)行分離培養(yǎng)：一、懸浮細(xì)胞的分離方法1、將血液、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉(zhuǎn)至離心管中，1000rpm/分鐘離心5分鐘。2、...

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