5
當前位置：武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司>>技術(shù)文章>>人真皮成纖維細胞傳代培養(yǎng)和凍存要點
人真皮成纖維細胞傳代培養(yǎng)和凍存要點
人真皮成纖維細胞分離自成人耳后真皮組織,成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。本公司生產(chǎn)的真皮成纖維細胞采用多種酶聯(lián)合消化法制備而來,且不含有-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。人真皮成纖維細胞在皮膚損傷及疤痕修復以及皺紋填充中具有廣闊應(yīng)用前景。
人真皮成纖維細胞傳代培養(yǎng)
1. 在顯微鏡下觀察細胞,當細胞融合度達到90%,即可傳代。
2. 在超凈臺/安全柜中,吸掉原有培養(yǎng)基,加入PBS溶液清洗一次,加入Xeno-Free細胞消化液(AC-1001024/1001025)使之*覆蓋皿/瓶底。
3. 室溫孵育4-5分鐘或37℃孵育2-4分鐘,顯微鏡下觀察大部分細胞脫離皿底即停止消化。
4. 加入消化液2倍體積的人真皮成纖維細胞培養(yǎng)基,用移液器輕輕吹打瓶壁上未*脫離的細胞,并輕輕吹打混勻,使細胞*分散。
5. 將細胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中,1000 rpm離心3 min。
6. 棄上清,加入人真皮成纖維細胞培養(yǎng)基,重懸細胞,計數(shù)。1:2-1:4比例傳代,或按2-5x104 cells/cm2 傳代,均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中,置于37℃,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意:人成纖維增殖情況與細胞密度密切相關(guān),所以傳代時細胞密度不宜過稀。
人真皮成纖維細胞凍存
1. 細胞達到90%匯合度, 吸掉原有培養(yǎng)基,PBS清洗一次。
2. 加入Xeno-Free細胞消化液(AC-1001024/1001025)使之*覆蓋皿/瓶底,室溫孵育4-5min或37℃孵育2-4min分鐘,顯微鏡下觀察大部分細胞脫離皿底即停止消化。
3. 加入消化液2倍體積的人真皮成纖維細胞培養(yǎng)基,用移液槍輕輕吹打瓶壁上未*脫離的細胞,并輕輕吹打混勻,使細胞*分散。
4. 將細胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中,1000 rpm離心3 min,吸掉上清。
5. 加入適量Serum-free細胞凍存液(AC-1001006),調(diào)整細胞凍存密度在1×106 cells/mL左右,每支凍存管分裝1.5-2ml。
6. 直接放入-80℃,24h后轉(zhuǎn)入液氮中長期保存。