PriCells: 人角質(zhì)形成細(xì)胞的分離培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)材料：

1. 早產(chǎn)兒或死亡胎兒的皮膚，也可用手術(shù)取下的成體皮膚

2. 1000000U/L中性蛋白酶，0.25%胰蛋白酶

3. MEM和HBSS混合液，添加20mmol/L HEPES、200000IU/L青霉素和200mg/L鏈霉素和1.5g/L慶大霉素

4. 手術(shù)刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷

5. 離心管（15ml、50ml）

實(shí)驗(yàn)方法：

1. 取厚1.5mm的皮片，用4℃MEM和HBSS混合液沖洗獲取的皮膚材料3次。將皮膚置于培養(yǎng)皿中，用鑷子和眼科剪仔細(xì)分離皮膚和皮下組織，去除脂肪和疏松結(jié)締組織。

2. 將皮膚展評(píng)，用手術(shù)刀切成2-3mm2的小片，放入中性蛋白酶消化液中，4℃下消化15-20h，或37℃下消化2-4h。

3. 用無菌針頭和眼科鑷子分離真皮與表皮。表皮薄而透明，真皮厚且輕微腫脹的凝膠狀。

4. 將分離出的表皮塊用0.25%胰蛋白酶，在37℃下振蕩消化10-20min后，加入含10%胎牛血清的培養(yǎng)基終止消化。

5. 1500r/min分離心5min，吸去上清液，用培養(yǎng)液重新懸浮沉淀細(xì)胞，用吸管輕輕吹散細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)。

6. 調(diào)整細(xì)胞密度至1.5×105個(gè)/ml，植于塑料培養(yǎng)皿培養(yǎng)，也可與滋養(yǎng)層細(xì)胞共同培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)覆蓋至培養(yǎng)皿底壁面積的70%-80%時(shí)，可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

7. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基

8. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑

9. PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒

10. PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒