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組織腎素（renin）定量檢測試劑盒操作程序
閱讀：1259 發(fā)布時間：2023-1-5組織腎素（renin）定量檢測試劑盒操作程序：
1.已稀釋好的ABC和TMB顯色液在加入酶標(biāo)板孔前都應(yīng)預(yù)先在37℃中平衡至少30分鐘。試劑或樣品稀釋時，切不可忘記混勻。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。用戶須估計(jì)樣品待測因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目，并增加1孔作為TMB空白顯色孔?？倲?shù)=樣品數(shù)+9；做雙份檢測時×2。其余重包裝好放入冰箱中。
2.將2000pg/ml,1000pg/ml，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.2pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品各100μL依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于人血清、血漿、尿液、細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清，直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品100μL。
3.酶標(biāo)板加上封板膜，37℃反應(yīng)90分鐘。
4.反應(yīng)后用自動洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。不洗。
5.將準(zhǔn)備好的生物素抗人renin抗體工作液按每孔100μL依次加入（TMB空白顯色孔除外）。
6.酶標(biāo)板加上封板膜，37℃反應(yīng)60分鐘。
7.1X洗滌緩沖液洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右（每孔洗液至少300μL）。
8.將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔100μL依次加入（TMB空白顯色孔除外）。
9.酶標(biāo)板加上封板膜，37℃反應(yīng)30分鐘。
10.1X洗滌緩沖液洗滌5次，每次浸泡1～2分鐘左右（每孔洗液至少300μL）。
11.按每孔90μL依次加入已在37℃平衡30分鐘的TMB顯色液，37℃避光反應(yīng)25～30分鐘。
12.注意：顯色時間供參考，因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異，最佳顯色時間會有所不同。此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3～4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3～4孔差別不明顯。
13.按每孔100μL依次加入終止液，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
14.用酶標(biāo)儀在450nm測定O.D.值。
15.有兩種設(shè)定空白對照的方案：
① 將TMB空白顯色孔(只加TMB顯色液和終止液)設(shè)為對照。所有的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的吸光值減去TMB空白顯色孔的吸光值后，在坐標(biāo)紙上畫出曲線，以吸光值作為縱坐標(biāo)，以濃度作為橫坐標(biāo)。
② 將零孔設(shè)為對照。所有的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的吸光值減去零孔的吸光值后，得到的數(shù)據(jù)可以直接在坐標(biāo)紙上畫出曲線。
根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實(shí)際濃度應(yīng)該×N。
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