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耶拿C5專業(yè)顯微鏡成像圖片

耶拿C5專業(yè)顯微鏡成像圖片

這款相機(jī)是Jenoptik的“Progres CCD Routine Camera” 系列中的五百萬(wàn)像素的制冷型號(hào)，大分辨率2580*1944，像素尺寸3.4μm，位數(shù)12bit，降溫15℃，廠家聲明的特色是“Visualize exact colors”，即色彩還原度好。根據(jù)參數(shù)，應(yīng)該是定位于明場(chǎng)高分辨彩色圖像的拍攝。相機(jī)外形個(gè)性，不同于常見(jiàn)相機(jī)的圓柱形或立方體。通過(guò)C接口與顯微鏡相連，通過(guò)1394a火線與計(jì)算機(jī)上的1394板卡相連，使用ProgRes CapturePro軟件采集圖像。軟硬件安裝簡(jiǎn)單快捷，一次成功。
    
安裝在倒置顯微鏡上的C5相機(jī)

一、明場(chǎng)圖像拍攝
    軟件啟動(dòng)迅速，界面一目了然，即使不看說(shuō)明書也能完成簡(jiǎn)單的拍攝操作。如圖所示，左上角“Live”鍵預(yù)覽，“Capture”鍵拍攝，可以設(shè)置自動(dòng)保存，但在非預(yù)覽狀態(tài)下不能拍攝。曝光時(shí)間可以通過(guò)鼠標(biāo)滾輪控制滑動(dòng)條來(lái)輕松設(shè)置，但滑動(dòng)條的數(shù)值不能連續(xù)變化。
  
ProgRes CapturePro軟件的圖像采集界面

嘗試對(duì)體外培養(yǎng)的原代海馬神經(jīng)元進(jìn)行自動(dòng)參數(shù)拍攝，結(jié)果如圖所示。自動(dòng)曝光快速、準(zhǔn)確，并且值得稱贊的是可以設(shè)置自動(dòng)曝光的增益補(bǔ)償。這個(gè)重要的小功能在我用過(guò)的一些采集軟件上都沒(méi)有，造成一旦自動(dòng)曝光不符合實(shí)際要求就只能改用手動(dòng)曝光。自動(dòng)白平衡準(zhǔn)確，設(shè)置時(shí)軟件提示要將光源調(diào)到亮，然后降到30%亮度，似乎想要一次設(shè)置就能適應(yīng)所有的亮度情況。每次拍攝完軟件總有1~2秒的停頓，但尚可接受。
 

                         自動(dòng)曝光的相差圖像1


自動(dòng)曝光的相差圖像2
  
               使用了取點(diǎn)模式的自動(dòng)白平衡，顏色有所偏差

二、熒光圖像拍攝
    雖然耶拿C5不是一款針對(duì)熒光拍攝的相機(jī)，對(duì)其熒光表現(xiàn)并不期待，但仍然希望它能兼顧較強(qiáng)的熒光，滿足用戶多樣的需求。選擇了中等強(qiáng)度熒光的樣品，使用NA=1.45的油鏡成像，肉眼下熒光清晰分明。使用耶拿C5的自動(dòng)曝光模式進(jìn)行拍攝，結(jié)果跳出曝光時(shí)間超出范圍的警告。如下圖所示，圖片能反映出熒光的范圍和形狀，但對(duì)比度不佳，細(xì)節(jié)損失較多。使用黑平衡后，效果也沒(méi)有改善。由于預(yù)覽時(shí)圖像質(zhì)量更低，熒光稍弱的視野就模糊不清，很難精確對(duì)焦。另外，沒(méi)有找到強(qiáng)度閾值調(diào)節(jié)功能。
 

  
自動(dòng)曝光的熒光圖像1
  
自動(dòng)曝光的熒光圖像2
  
                        對(duì)熒光圖像2使用自動(dòng)黑平衡模式

三、與自用相機(jī)的對(duì)比
很遺憾這次沒(méi)有拿到同一的相機(jī)進(jìn)行對(duì)比，而是找了個(gè)制冷的黑白CCD。希望這種跨級(jí)比較也能幫助大家從中把握耶拿C5相機(jī)的大致成像水平。自用相機(jī)像素尺寸6.45μm，12bit，制冷到-20℃，是一款針對(duì)熒光成像的相機(jī)。
       耶拿C5                            自用相機(jī)
         
右圖對(duì)比度好于左圖
       
兩張圖片細(xì)節(jié)表現(xiàn)基本*
       
曝光時(shí)間*，左圖對(duì)比右圖有所差距
               
增加C5的曝光時(shí)間，左圖的質(zhì)量有所提高
       
增加C5的曝光時(shí)間，左圖也反映出了一些較弱的熒光

四、特色功能
    該軟件還有一些特色功能，如熒光通道疊加、景深擴(kuò)展、時(shí)間間隔拍攝等。這里只測(cè)試了熒光疊加功能。需要預(yù)先測(cè)試出佳的曝光時(shí)間，填入表格，再進(jìn)行拍攝和疊加。疊加時(shí)不能單調(diào)節(jié)每個(gè)通道，因此之前要仔細(xì)測(cè)試曝光時(shí)間。疊加效果尚佳，如圖所示。
 

  
                    GFP通道
  
                  DAPI通道
  
                    熒光疊加

五、總結(jié)
該相機(jī)在明場(chǎng)方面的表現(xiàn)可圈可點(diǎn)，軟、硬件成熟度高，方便易用，用戶體驗(yàn)好，能夠*明場(chǎng)拍攝的需要。受限于CCD芯片，該相機(jī)的熒光表現(xiàn)很一般，但通過(guò)延長(zhǎng)曝光時(shí)間可以滿足一定的熒光拍攝要求。適用于熒光較強(qiáng)的樣品，以及只需要表現(xiàn)熒光有無(wú)、或熒光形狀的實(shí)驗(yàn)。例如細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)、細(xì)胞核計(jì)數(shù)、細(xì)胞活力檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)?？傊?，耶拿C5是一款成熟可靠的、能夠*表現(xiàn)明場(chǎng)圖像的相機(jī)