孔雀石綠（Malachite Green），又名堿性綠、孔雀綠，化學(xué)名稱為四甲基代二氨基三苯甲烷，商品孔雀石綠以孔雀石綠草酸鹽、孔雀石綠鹽酸鹽或孔雀石綠氯化物的形式存在，是一種帶有金屬光澤的綠色結(jié)晶體，常用為殺真菌劑或者染料。以來，漁民在運(yùn)輸過程中和存放池內(nèi)，也常使用孔雀石綠，以預(yù)防魚類的水霉病、鰓霉病、小瓜蟲病等，同時(shí)可以延長鱗受損的魚的生命?？蒲薪Y(jié)果表明，孔雀石綠在魚體內(nèi)殘留時(shí)間很長，且具有高毒性、高殘留和致癌、致畸、致突變等副作用。有鑒于此，許多國家將孔雀石綠列為水產(chǎn)養(yǎng)殖禁用藥物。2002年5月，我國也將孔雀石綠列入《動(dòng)物食品禁用的獸藥及其化合物清單》中。但是，因其廉價(jià)，且治病功效是其他藥物“不能替代”的，故利益的驅(qū)動(dòng)使得孔雀石綠并沒有退出漁業(yè)市場。
結(jié)晶紫，是甲基紫（Methyl Violet）的俗稱，又名龍膽紫，是一類三苯基甲烷類工業(yè)染料和消毒防腐藥，有較好的殺菌作用，具有、廉價(jià)、易得等優(yōu)點(diǎn)，作為化學(xué)消毒劑被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病防治中。結(jié)晶紫具有高毒性、高殘留和致癌、致畸、致突變等副作用，各國也已禁止其在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中使用。
天瑞儀器一直于為客戶提供更完善的解決方案，LC-310液相色譜儀可同時(shí)用于水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的檢測。
1.儀器簡介
LC-310液相色譜儀是天瑞儀器多年液相色譜研發(fā)經(jīng)驗(yàn)的結(jié)晶，具有較高的靈敏度、分離度和可靠性。
圖1. LC-310液相色譜儀外觀圖
2. 實(shí)驗(yàn)部分
2.1檢測原理
將樣品中殘留的孔雀石綠和結(jié)晶紫用還原為其相應(yīng)的代謝產(chǎn)物隱性孔雀石綠和隱性結(jié)晶紫，用乙腈-乙酸銨緩沖溶液混合提取，二氯甲烷液液萃取，固相萃取柱凈化，反相色譜柱分離，液相色譜-熒光檢測器檢測，以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。
2.2主要儀器、耗材和試劑
LC-310液相色譜儀（配套熒光檢測器）：江蘇天瑞儀器股份有限公司；
分析天平：精度十萬分之一（BT 125D，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）
超聲波清洗器（SK40Y，張家港市神科超聲電子有限公司）；
超純水機(jī)（Milli-Q Advantage A10，美國默克密理博公司產(chǎn)品）；
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE-3000A，上海亞榮生化儀器廠）；
數(shù)顯高速分散均質(zhì)機(jī)(FJ300-S，上海索映儀器設(shè)備有限公司)
固相萃取裝置（Supelco12，北京恒奧德儀器儀表有限公司）；
固相萃取柱（Cleanert PRS，500mg/3ml，博納艾爾科技）；
漩渦振蕩器等（QL-866，海門市其林貝爾儀器制造有限公司）。
2.3儀器測試條件
色譜柱：TR C18-X，4.6mm*250mm，5μm（江蘇天瑞儀器股份有限公司）；
流動(dòng)相：乙腈+乙酸銨緩沖液（0.125mol/l，PH4.5）=80+20
柱流量： 1.3ml/min；
柱溫： 35℃；
進(jìn)樣量：20μl；
檢測器：熒光檢測器
激發(fā)波長：265nm，發(fā)射波長：360nm；
圖2.孔雀石綠和結(jié)晶紫標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖
三、小結(jié)
LC-310液相色譜儀測定水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫的殘留量，靈敏度高，樣品干擾小，本方法條件下的孔雀石綠和結(jié)晶紫的方法檢出限均不超過0.5μg/kg，滿足國標(biāo)及水產(chǎn)行業(yè)的管控要求。
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