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            孕酮快速檢測試劑盒使用說明書

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              2025年04月17日
            關(guān)鍵詞
            孕酮快速,使用說明書,檢測試劑盒,孕酮試劑盒,試劑盒
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            上海研謹(jǐn)生物科技有限公司
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            資料簡介

            孕酮快速檢測試劑盒使用說明書

            【原理】

            本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物孕酮和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭孕酮抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物孕酮的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較可得出相應(yīng)殘留物孕酮的含量。

            【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】  

            規(guī)       格:96/

            靈 敏 度: 0.1ppb

            檢測時間:75min

            樣本定量檢測下限

            組織(蝦、魚)……………………………………0.1ppb

            豬肉/肝 雞肉/肝 …………………………………… 1ppb

            飼料………………………………………………… 4ppb

            奶液…………………………………………………1ppb

            交叉反應(yīng)率

            孕  酮………………………………………………100%

            雌二醇……………………………………………< 0.1%

            雌三醇…………………………………………… < 0.1%

            樣本回收率

            飼  料……………………………………………90±10%

            組  織……………………………………………85±10%

            奶  液……………………………………………70±10%

            試劑盒組成】  

            1、微量測試孔:每條8孔,一板12

            2、標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶:(1ml/瓶)0ppb、0.1 ppb、 0.3 ppb0.9ppb、2.7ppb8.1 ppb

            3、高濃度標(biāo)準(zhǔn)品:×1瓶:(1ml/瓶) 100ppb

            3、酶標(biāo)記物    12ml………………………………紅色帽

            4、抗體工作液    7ml………………………………藍色帽

            5、底物液 A液   7ml………………………………棕色帽

            6、底物液 B液   7ml……………………………… 黑色帽

            7、終 止 液         7ml……………………………… 黃色帽

            8、20X濃縮洗滌液  40ml…………………………白色帽

            92X濃縮復(fù)溶液   50ml…………………………藍色帽

            所用儀器、試劑】  

            儀器:微孔板酶標(biāo)儀450nm/630nm、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/氮氣吹干裝置、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管天平感量0.01g 

            微量移液器:單道 20µl200µl、100µl1000µl、多道 250µl

               劑:乙腈、正己烷、氯化鈉

            實驗前溶液配制

            配液1、2X濃縮復(fù)溶液用去離子水按照11稀釋(1 份濃

                          縮復(fù)溶液+1份去離子水)用于樣本的復(fù)溶。

            配液240ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照

                         119稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按

                        所需用量配制洗滌液。

            【樣本前處理步驟】  

            處理任何樣本時,都必須注意:

            a)實驗中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時要更換吸頭。

            b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。

            a)飼料樣本

            1、 稱取2±0.05g搗粹后的飼料樣本,加入8ml乙腈,振搖5min,15℃,4000r/min以上,離心10min;

            2、 2ml上清液,60℃氮氣/空氣吹干;

            3、 1ml正己烷溶解干燥的殘留物,加入1ml稀釋后的復(fù)溶液混合30s;室溫4000r/min以上,離心10min,

            不同樣本按如下方法稀釋:

            配合料:取50µl,加入450µl稀釋后的復(fù)溶液,渦動混勻30s,取50µl 用于檢測。

            濃縮料/預(yù)混料:取50µl,加入950µl稀釋后的復(fù)溶液,渦動混勻30s,取50µl 用于檢測。

            配合料稀釋倍數(shù):20      

            濃縮料、預(yù)混料稀釋倍數(shù):40

            b)組織(雞肉/肝、豬肉/肝、蝦、魚)

            1、 稱取2±0.05g勻漿后的樣本,加入1氯化鈉6ml乙腈,振搖5min15℃,4000r/min以上離心10min。

            2、 3ml上清液,60℃氮氣/空氣吹干。

            3、 1ml正己烷溶解殘留物,加入1ml稀釋后的復(fù)溶液混合30s;室溫4000r/min以上,離心5min,

            不同樣本按如下方法稀釋:

                  蝦魚:直接取50µl下層水相用于檢測。

                  豬肉/雞肉/肝:取50µl下層水相加入450µl

                  釋后 的復(fù)溶液,渦動混合30s50µl用于檢測。

                  樣本的稀釋倍數(shù):

                  蝦魚稀釋倍數(shù):1      

                  豬肉/雞肉/肝稀釋倍數(shù):10

            c牛奶高檢測限處理方法;

            1、 2ml奶液到離心管中,加入3氯化鈉,6ml乙氰,強烈振蕩5min,室溫4000r/min以上,離心10min,直至清亮

            2、 移取3ml清液至干凈的試管中60℃氮氣/空氣吹干;

            3、 1ml正己烷溶解殘留物,加入1ml稀釋后的復(fù)溶液混合30s室溫4000r/min以上,離心10min;

            4、 50µl下層水相用于檢測分析。

                  樣本的稀釋倍數(shù):1

            d牛奶低檢測限處理方法;

            1、 直接取50µl牛奶+450µl稀釋后的復(fù)溶液混合30s

            2、 50µl用于檢測分析。

                   樣本稀釋倍數(shù):10

            酶標(biāo)免疫分析程序】  

            操作步驟:

            1、 4℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,置室 溫(20-25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

            2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8℃。

            3、 編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

            4、 加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加抗體50µl/孔,用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻。25環(huán)境中反應(yīng)30min。

            5、 取出將孔內(nèi)液體甩干,用洗液250µl /孔,洗板45次,每次間隔15-30s,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

            6、 每孔加入酶標(biāo)記物100µl,蓋板膜蓋板后置25環(huán)境中反應(yīng)30min。取出將孔內(nèi)液體甩干,用洗液250µl /孔,洗板45次,每次間隔15-30s,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

            7、 顯色:每孔加入底物液A50µl 再加B50µl,輕輕振蕩混勻,25環(huán)境中避光顯色15min。

            8、 測定:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測定每孔OD值。

            結(jié)果判定】  

            結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含孕酮成負(fù)相關(guān)。

            1、粗略判定

            用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)吸光度值比較即可得出其濃度范圍(ppb)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.310, 樣本2的吸光度值為0.820,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb1.510;0.1ppb1.3200.3ppb1.030;0.9ppb0.660; 2.7ppb0.389;8.1ppb0.198。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb-8.1ppb; 樣本2的濃度范圍是0.3 ppb-0.9 ppb。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中孕酮實際含量。

            2、定量分析

            1)百分吸光率的計算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即:

            百分吸光度值(% 

            B

            ×100%

            B0

            B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

            B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

            2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算

            以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以孕酮濃度(ng /ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中孕酮實際含量。

            若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來電索取)  

            3、標(biāo)準(zhǔn)曲線

            B/B0 (%)

                                                 孕酮(ppb) [µg/kg]

                                    圖1:孕酮檢測試劑盒的回歸曲線

            4、再現(xiàn)性

            %CV

                                     孕酮(ppb) [µg/kg]

                           圖2:孕酮檢測試劑盒的精密度

            由多個不同的實驗結(jié)果確定了精密度,圖2顯示出孕酮檢測試劑盒的精密度情況,獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)(%CV)對相應(yīng)孕酮濃度作曲線,可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低,可以得到很好的再現(xiàn)性。

            注意事項】  

            1、 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒有回到室溫(20-25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

            2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。

            3、 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

            4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

            5、 不要使用過了有效日期的試劑盒,稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。

            6、 不用的微孔板放進自封袋密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

            7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位(A450nm< 0.5 )時,表示試劑可能變質(zhì)。

            8、 該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

            【儲存】

            原包裝應(yīng)儲存于28℃保鮮冷藏,切勿冷凍。

            【有效期】

            有效期12個月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號見外包裝。

            從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十余年,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

            如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

            實驗技術(shù)服務(wù):




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