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　　大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)ELISA試劑盒的實驗使用說明書通常包含以下內(nèi)容，但請注意，具體說明可能因不同制造商和試劑盒版本而有所差異。以下是一個基于通用標準的概述：

　　BS-8543   大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)ELISA試劑盒

　　一、產(chǎn)品概述

　　?用途?：本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)的含量，僅供研究使用。

　　二、實驗原理

　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)水平。用純化的大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體。往包被的微孔中依次加入大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)，再與HRP標記的檢測抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物。經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)含量。

　　三、試劑盒組成

　　試劑盒通常包含酶標包被板、標準品、酶標試劑、樣品稀釋液、顯色劑A液、顯色劑B液、終止液、濃縮洗滌液等組件，具體數(shù)量和配置可能因試劑盒規(guī)格(如48孔或96孔)而異。

　　四、樣本采集與處理

　　?血清?：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。

　　?血漿?：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。

　　?尿液?：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

　　?細胞培養(yǎng)上清?：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。

　　?組織標本?：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS(PH7.4)。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。

　　標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　五、實驗步驟

　　?標準品的加樣?：設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品。

　　?加樣?：在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液，然后再加待測樣品。加樣時將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　?加酶?：每孔加入酶標試劑(空白孔除外)。

　　?溫育?：用封板膜封板后置37℃溫育一定時間。

　　?配液?：將濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋后備用。

　　?洗滌?：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置后棄去，重復(fù)多次，拍干。

　　?顯色?：每孔加入顯色劑A和B，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色。

　　?終止?：每孔加終止液，終止反應(yīng)。

　　?測定?：以空白孔調(diào)零，在450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。

　　六、注意事項

　　試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡一段時間后方可使用。

　　濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

　　各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性。

　　封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　底物應(yīng)避光保存。

　　嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

　　七、性能與保存

　　?性能?：樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值通常高于0.95，批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于10%和15%。

　　?保存?：試劑盒應(yīng)保存在2-8℃，有效期通常為6個月。

　　請注意，以上信息為通用標準概述，具體實驗時應(yīng)嚴格遵循所使用試劑盒的說明書進行操作。