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            犬組織型纖溶酶原激活物(tPA)定量檢測試劑盒(ELISA)

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              2012年05月04日
            關鍵詞
            犬組織型纖溶酶原激活物(tPA)定量檢測試劑盒(ELISA),上??ㄅ珽LISA試劑有限公司,eli
            上傳者
            上??ㄅ珽LISA試劑有限公司
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            資料簡介

            本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫(yī)學診斷。

             

            犬組織型纖溶酶原激活物(tPA)定量檢測試劑盒(ELISA

            使用說明書

                                                                                                                                        

            【試劑盒名稱】

            犬組織型纖溶酶原激活物tPA)定量檢測試劑盒(ELISA

            【試劑盒用途

            定量檢測血清、血漿及相關液體樣本中組織型纖溶酶原激活物tPA的含量。

            【檢測原理

            本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被犬組織型纖溶酶原激活物(tPA單克隆抗體透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中犬組織型纖溶酶原激活物(tPA濃度呈正相關,450nm波長下測定OD值,根據(jù)標準品和樣品的OD值,計算樣本中犬組織型纖溶酶原激活物tPA含量。

            【試劑盒組成

            1

            酶標包被板

            12×8

            7

            顯色劑A

            6mL

            2

            標準品:20ng/mL

            0.6mL

            8

            顯色劑B

            6mL

            3

            20倍濃縮洗滌液

            25mL

            9

            終止液

            6mL

            4

            標準品稀釋液

            6mL

            10

            說明書

            1

            5

            樣本稀釋液

            6mL

            11

            封板膜

            2

            6

            酶標試劑

            6mL

            12

            密封袋

            1

            備注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:2010、52.5、1.25、0.625ng/mL。

             

            需要而未提供的試劑和器材

            137恒溫箱

            2、標準規(guī)格酶標儀

            3、精密移液器及一次性吸頭

            4、蒸餾水

            5、一次性試管

            6、吸水紙

            【操作步驟】

            1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。

            2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

            3、加標準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。

            4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

            5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

            6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。

            7、溫育:重復4的操作。

            8、洗板:重復5的操作。

            9、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,再加入顯色劑B 50μL37℃避光顯色15min。

            10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

            11、測定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。

            12、計算:根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

            【樣本要求】

            1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3,因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

            2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

            3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。

            【注意事項】

            1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

            2、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

            3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。

            4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計算結果乘以5才是樣本實際濃度。

            5、本試劑盒定量范圍為0.625-20ng/mL,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結果,請用標準品稀釋液稀釋后測定準確結果(0.625-20ng/mL范圍內(nèi)),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

            6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。

            7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。

            8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號的試劑不得混用。

            9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

             

            【操作程序總結】

             

            準備試劑,樣品和標準品

             


             

            加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘

             

            洗板4次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘

             

            洗板4次,加入顯色液AB,37℃顯色15分鐘

             

            加入終止液

             

            15分鐘之內(nèi)讀OD

             

            計算

             

            檢測范圍

            0.625-20ng/mL

            【規(guī)格】

            96人份/

            【貯藏】

            2-8℃,避光防潮保存。

            【有效期】

            6個月

             http://kanu.caigou.com.cn/

            免責聲明

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