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液相色譜柱是高效液相色譜(HPLC)系統(tǒng)的核心部件，其性能直接影響分離效果和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。色譜柱價(jià)格昂貴且易受污染或損壞，因此科學(xué)的養(yǎng)護(hù)至關(guān)重要。以下是液相色譜柱養(yǎng)護(hù)的詳細(xì)指南，涵蓋安裝、使用、存儲(chǔ)及問(wèn)題處理等關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
一、安裝前的準(zhǔn)備
1. 確認(rèn)色譜柱規(guī)格
根據(jù)樣品性質(zhì)和分離需求選擇合適填料(如C18、氰基、氨基等)、粒徑(1.7μm~5μm)和孔徑的色譜柱。
檢查柱壓耐受范圍(通常為40600 bar)，避免超限使用。
2. 檢查封口與兼容性
新柱開(kāi)封后需確認(rèn)密封完好，檢查柱床是否平整(可通過(guò)觀察入口端填料有無(wú)裂紋或凹陷)。
使用前用少量純甲醇或乙腈浸潤(rùn)填料，防止干燥填料直接接觸流動(dòng)相導(dǎo)致收縮變形。
二、流動(dòng)相的優(yōu)化與處理
1. 流動(dòng)相的過(guò)濾與脫氣
過(guò)濾：所有流動(dòng)相需經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾，去除微粒雜質(zhì)(尤其是緩沖鹽析出的顆粒)。
脫氣：超聲脫氣20分鐘或采用在線脫氣機(jī)，避免氣泡進(jìn)入柱床導(dǎo)致局部壓力不穩(wěn)或填料沖蝕。
2. pH值與溶劑兼容性
硅膠基質(zhì)柱(如C18)適用pH 28，高pH會(huì)導(dǎo)致硅膠溶解；聚合物基質(zhì)柱(如PLRPS)可耐受更廣pH范圍(112)。
避免使用含氯離子的緩沖液(如KCl)，優(yōu)先選用磷酸鹽或醋酸鹽緩沖體系。
水性流動(dòng)相中需加入一定比例有機(jī)溶劑(如5%10%乙腈)防止填料吸水膨脹。
三、樣品前處理
1. 去除懸浮物與雜質(zhì)
樣品需經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾或離心(10,000 rpm以上)，杜絕固體顆粒堵塞柱頭。
復(fù)雜樣品建議萃取凈化(如SPE固相萃取)，去除蛋白質(zhì)、脂類等大分子物質(zhì)。
2. 溶劑匹配與稀釋
樣品溶劑需與流動(dòng)相兼容，避免直接進(jìn)樣強(qiáng)極性或高粘度溶劑(如原油)。
高濃度樣品需稀釋至線性范圍(通常不超過(guò)10 mg/mL)，防止過(guò)載污染柱床。
四、日常使用規(guī)范
1. 流速與壓力控制
初始使用時(shí)以低流速(如0.20.5 mL/min)平衡柱子，避免突然高壓沖擊。
常規(guī)流速不超過(guò)柱標(biāo)稱上限(如4.6×250 mm柱流速≤1 mL/min)，超壓可能導(dǎo)致填料壓縮或破損。
2. 梯度洗脫后沖洗
完成梯度程序后，需用初始流動(dòng)相(如高水相)沖洗30分鐘，清除緩沖鹽殘留。
長(zhǎng)期使用緩沖鹽后，需用10%甲醇水溶液沖洗柱床，防止鹽析出堵塞。
3. 溫度控制
恒溫箱溫度波動(dòng)需小于±2℃，高溫可能加速填料老化，低溫則影響傳質(zhì)效率。
五、存儲(chǔ)與保養(yǎng)
1. 短期停用(<48小時(shí))
保持流動(dòng)相持續(xù)沖洗(如甲醇水混合相)，防止填料干燥開(kāi)裂。
禁用純水或緩沖液靜置，避免微生物滋生或填料吸水膨脹。
2. 長(zhǎng)期存儲(chǔ)(>48小時(shí))
硅膠柱：用純甲醇或乙腈保存，定期更換保存溶劑(每12周)。
極性柱(如氨基柱)：儲(chǔ)存于甲醇水(50:50)混合液，防止氨基脫水失活。
反相柱(如C18)：可用異丙醇替代甲醇，抑制微生物生長(zhǎng)。
六、常見(jiàn)問(wèn)題與處理
1. 柱壓升高
原因：填料堵塞、篩板污染或柱頭塌陷。
處理：反向沖洗(如C18柱用甲醇→水反向沖洗)，更換入口篩板或切除柱頭12 cm。
2. 峰形變寬或拖尾
原因：填料老化、鍵合相流失或金屬離子污染。
處理：用0.1 M硝酸沖洗金屬污染，老化柱需再生或更換。
3. 保留時(shí)間漂移
原因：固定相流失或流動(dòng)相組成變化。
處理：校準(zhǔn)流動(dòng)相比例，老化柱可嘗試高溫再生(如60℃甲醇沖洗)。
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