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蛋白表達(dá)純化的方法主要可以分為三類沉淀、離心和層析三種
蛋白表達(dá)純化中的表達(dá)是指用模式生物如細(xì)菌、酵母、動(dòng)物細(xì)胞或者植物細(xì)胞表達(dá)外源基因蛋白的一種分子生物學(xué)技術(shù)。純化是指利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其它蛋白中純化出來(lái)的一種生物化學(xué)方法。蛋白質(zhì)量表征是指通過(guò)表征蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)、熱穩(wěn)定性以及聚集態(tài)等信息來(lái)評(píng)估所獲取蛋白質(zhì)量的一種物理化學(xué)方法。
蛋白表達(dá)純化的方法主要可以分為三類沉淀、離心和層析。具體可以分為：
鹽析沉淀是在蛋白質(zhì)水溶液中加入中性鹽，隨著鹽濃度增大而使蛋白質(zhì)沉淀出來(lái)的方法。等電點(diǎn)沉淀是利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)溶解度低而不同蛋白質(zhì)又具有不同等電點(diǎn)的特點(diǎn)進(jìn)行分離的方法。有機(jī)溶劑沉淀是利用與水互溶的有機(jī)溶劑使蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著降低而沉淀的方法。
速率區(qū)帶離心是根據(jù)顆粒在介質(zhì)中的沉降速度不同來(lái)分離試樣的方法。差速離心是逐漸提高離心速度來(lái)分離不同大小的細(xì)胞器的方法。
疏水相互影響層析是利用蛋白質(zhì)表面的疏水部位和固定相上的疏水基團(tuán)的結(jié)合來(lái)分離不同蛋白質(zhì)的方法。凝膠層析是利用混合物隨流動(dòng)性相流過(guò)配有凝膠固定不動(dòng)相的層析柱時(shí)速度不一致而分離的方法。由于存在特異性低、純化蛋白純度不高和活性低等缺點(diǎn)，在實(shí)際生產(chǎn)中用的頻次比較低。應(yīng)用較多的純化方法是層析法中的親和層析和離子交換層析。
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