哺乳動物細胞真核表達系統(tǒng)的瞬時表達是通過轉染試劑完成的
哺乳動物細胞真核表達系統(tǒng)能表達天然結構完整的重組蛋白,是廣泛應用的人類復雜糖基化蛋白的表達系統(tǒng),生物活性接近于天然蛋白質,是活性蛋白因子及各類受體蛋白的表達系統(tǒng),在生物制藥領域應用較廣, 60%以上的的藥用蛋白產(chǎn)品由哺乳動物細胞表達系統(tǒng)獲得。哺乳動物細胞瞬時轉染能在短期內(nèi)快速表達高活性蛋白,滿足蛋白制備的需求。
哺乳動物細胞真核表達系統(tǒng)是通過脂質體或者是PEI的等轉染試劑在體外通過和質粒形成復合體, 將質粒導入細胞后進行瞬時表達。稱為瞬時表達的原因是因為質粒在真核細胞中不能擴增。并且不斷被細胞所降解,這種表達在一定的時間后就會消失。除非質粒被整合進入細胞的基因組,通過質粒上帶的篩選標記,通過篩選得到一株穩(wěn)定表達你的目的蛋白的細胞克隆。但是這種細胞克隆的表達量相比瞬時表達會非常低甚至于檢測不到。
哺乳動物細胞真核表達系統(tǒng)特點:
表達水平高:載體可在哺乳動物細胞中高表達重組蛋白,表達量可高達1-3g/L。
蛋白表達高效穩(wěn)定:高效啟動子控制,穩(wěn)定表達,并可以選擇多種表達系統(tǒng)。
選項:瞬時表達、穩(wěn)定細胞株表達、營養(yǎng)缺陷型細胞株表達、大規(guī)模懸浮細胞表達等。
適合大規(guī)模蛋白表達:常用的哺乳動物表達宿主細胞,使用懸浮細胞培養(yǎng),可以在一個月內(nèi)可產(chǎn)生數(shù)克級蛋白。
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