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篩選穩(wěn)定細胞株的兩種方法：
1.單克隆環(huán)法主要用于整合率低的轉(zhuǎn)染法以及獲得單克隆細胞株。單克隆環(huán)法具有工作量小的優(yōu)點，只要把轉(zhuǎn)染體細胞按一定的細胞密度放入新的培養(yǎng)皿，用合適的藥物篩選并在培養(yǎng)皿中進行擴增，適合少量勞動力作業(yè)，其劣勢可能難以獲得高產(chǎn)率的穩(wěn)定株。
2.逆轉(zhuǎn)錄病毒的混合克隆技術(shù)篩選：
此法可用于制備穩(wěn)定混合細胞株，其優(yōu)點在于能在短時間內(nèi)得到穩(wěn)定的胞株，且能在任何時候?qū)⒓毎♂尦尚碌呐囵B(yǎng)皿，傾向于整合靠近轉(zhuǎn)錄始端的位點的基因，容易激活下游基因，但同時這些整合到轉(zhuǎn)錄活性基因的基因很容易導致整合部位基因的插入失效，影響到克隆的純度。高等株中存在非整合細胞，這種混合細胞內(nèi)的細胞穩(wěn)定結(jié)合，不會失去生長的優(yōu)勢。
細胞株的凍存步驟：
取培養(yǎng)2～3天生長旺盛的細胞，用細胞培養(yǎng)液將細胞配成2×106～2×107/ml。在1ml細胞凍存管中加入0.5ml細胞懸液，0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亞砜（或甘油），混勻后密封。置4℃ 1小時，－20℃ 2小時，然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上過夜后浸入液氮中。
細胞株的復蘇流程：
復蘇時，從液氮中取出凍存管，立即置37℃水浴中融化細胞。將細胞直接加入10ml含15％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，置37℃ 5％CO2飽和水套式二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。懸浮細胞待細胞全部沉降后小心吸去上清液，更換新鮮的上述培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)；帖壁細胞則培養(yǎng)2～3實驗。
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