熒光定量PCR，你了解多少

來源：匯像智能科技（上海）有限公司 2020年11月25日 11:11

實時熒光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一種在DNA擴增反應中，以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法，通過內參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。

技術原理：

實時熒光定量PCR，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的，隨著反應循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應不再以指數(shù)方式生成模板，從而進入平臺期。將已知濃度的標準品梯度稀釋進行Real Time PCR，按照起始DNA量由多到少的順序等間隔得到一系列擴增曲線。Ct值與起始模板數(shù)的對數(shù)值之間存在線性關系，可以制作標準曲線。未知濃度的樣品也得到Ct值，代入標準曲線，就可以求出未知樣品的起始模板量。

PHS智能熒光定量PCR儀主要用于基因擴增檢測，通過在PCR反應體系中加入熒光染料或探針等試劑，熒光型號不斷累積實現(xiàn)實時監(jiān)測PCR擴增反應全過程，通過Ct值和標準曲線，終達到檢測目標基因的目的。用于基因定性定量分析，基因檢測，基因分型，SNP分析（單核苷酸的多態(tài)性），RFLP多態(tài)性分析（限制性片段長度多態(tài)性），基因表達研究，高通量基因表達譜研究，以及STR鑒定等檢測。

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