導(dǎo)語(yǔ)

說(shuō)起MALDI-TOF（基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜）很多人都不陌生，通過(guò)“軟電離”方式與飛行時(shí)間質(zhì)譜的結(jié)合，可以快速檢測(cè)多肽、多糖、蛋白、聚合物、脂類等各種天然或合成有機(jī)分子的分子量，檢測(cè)成本低、前處理簡(jiǎn)單、分析通量高、結(jié)果準(zhǔn)確，廣泛應(yīng)用于研究開(kāi)發(fā)以及質(zhì)控管理等各類。

臺(tái)式MALDI-8020外觀

MALDI- 8020體積小巧，配備355 nm 200Hz固態(tài)激光器，支持離子源自清洗，軟件界面友好，適合實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)定性及定量檢測(cè)。

2018年，標(biāo)準(zhǔn)化組織（ISO）發(fā)布了利用MALDI-TOF MS檢測(cè)特征性多肽來(lái)進(jìn)行紡織品中動(dòng)物毛發(fā)纖維定性和定量分析的方法（ISO 20418-2: 2018），利用羊絨、羊毛蛋白酶解產(chǎn)物中角蛋白特征多肽峰的相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度比值可以直接換算出羊絨、羊毛含量的比值。這種方法相比傳統(tǒng)的顯微觀察法，更加客觀準(zhǔn)確、分析通量更高，同時(shí)也彌補(bǔ)了熒光定量PCR檢測(cè)DNA受損傷的樣品結(jié)果不準(zhǔn)確的缺陷。下面我們來(lái)看下應(yīng)用臺(tái)式MALDI-TOF(MALDI-8020)檢測(cè)羊絨含量的具體的操作方法及結(jié)果。

表1. 羊絨與羊毛物種特異性I型角蛋白多肽位點(diǎn)

注：*代表C上發(fā)生烷基化修飾；紅色字母代表特征位點(diǎn)。

將羊絨、羊毛標(biāo)準(zhǔn)品按照一定比例混合，提取蛋白并酶解后，取酶解產(chǎn)物進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，質(zhì)譜圖見(jiàn)圖1。

圖1. 羊絨羊毛混合標(biāo)準(zhǔn)品酶解產(chǎn)物一級(jí)質(zhì)譜圖

根據(jù)不同比例羊絨與羊毛混合標(biāo)準(zhǔn)品中的羊絨特征峰的相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度的平均值與羊絨含量（%）建立校準(zhǔn)曲線，結(jié)果見(jiàn)下圖。

圖2. 羊絨、羊毛混合物中羊絨含量的校準(zhǔn)曲線

根據(jù)建立的校準(zhǔn)曲線，測(cè)試經(jīng)檢測(cè)部門驗(yàn)證過(guò)的實(shí)際樣品，樣品羊絨含量標(biāo)注值及實(shí)測(cè)值統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表2所示。由結(jié)果可知，實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果與標(biāo)注值一致，表明該方法可以用于羊絨制品中羊絨含量的檢測(cè)。

表2. 羊絨制品實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果

當(dāng)然，MALDI-TOF不止可以定量檢測(cè)羊絨、羊毛混合品中的羊絨含量，還可以利用其穩(wěn)定的定量能力應(yīng)用于臨床檢測(cè)與疾病的診斷、食品的摻假鑒別、基礎(chǔ)科學(xué)研究等領(lǐng)域，隨著研究人員的努力，MALDI-TOF的定量性能將在更多領(lǐng)域內(nèi)大放異彩。