液相色譜儀常用的檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器,包括二極管陣列檢測(cè)器,其他常見(jiàn)的檢測(cè)器有熒光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器和質(zhì)譜檢測(cè)器等。紫外、熒光、電化學(xué)檢測(cè)器為選擇性檢測(cè)器,其響應(yīng)值不僅與供試品溶液的濃度有關(guān),還與化合物的結(jié)構(gòu)有關(guān);蒸發(fā)光散射檢測(cè)器和示差折光檢測(cè)器為通用型檢測(cè)器,對(duì)所有的化合物均有響應(yīng);蒸發(fā)光散射檢測(cè)器對(duì)結(jié)構(gòu)類(lèi)似的化合物,其響應(yīng)值幾乎僅與供試品的質(zhì)量有關(guān);二極管陣列檢測(cè)器可以同時(shí)記錄供試品的吸收光譜,故可用于供試品的光譜鑒定和色譜峰的純度檢查。
紫外、熒光、電化學(xué)和示差折光檢測(cè)器的響應(yīng)值與供試品溶液的濃度在一定范圍內(nèi)呈線(xiàn)性關(guān)系,但蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的響應(yīng)值與供試品溶液的濃度通常呈指數(shù)關(guān)系,故進(jìn)行計(jì)算時(shí),一般需經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換。
不同的檢測(cè)器,對(duì)流動(dòng)相的要求不同。如采用紫外檢測(cè)器,所用流動(dòng)相應(yīng)符合紫外-可見(jiàn)分光光度法(2010年版藥典二部附錄ⅣA)項(xiàng)下對(duì)溶劑的要求;采用低波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),還應(yīng)考慮有機(jī)相中有機(jī)溶劑的截止使用波長(zhǎng),并選用色譜級(jí)有機(jī)溶劑。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器和質(zhì)譜檢測(cè)器通常不允許使用含不揮發(fā)性鹽組分的流動(dòng)相。
反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑,常用的色譜柱填充劑為化學(xué)鍵合硅膠,以十八烷基硅烷鍵合硅膠為常用,辛基硅烷鍵合硅膠和其他類(lèi)型的硅烷鍵合硅膠(如氰基鍵合硅烷和氨基鍵合硅烷等)也有使用。正相色譜系統(tǒng)使用極性填充劑,常用的填充劑有硅膠等。離子交換色譜系統(tǒng)使用離子交換填充劑;分子排阻色譜系統(tǒng)使用凝膠或高分子多孔微球等填充劑;對(duì)映異構(gòu)體的分離通常使用手性填充劑。填充劑的性能(如載體的形狀、粒徑、孔徑、表面積、鍵合基團(tuán)的表面覆蓋度、含碳量和鍵合類(lèi)型等)以及色譜柱的填充,直接影響供試品的保留行為和分離效果。
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