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            北京萊伯泰科儀器股份有限...

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            耗材專區(qū) | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽過程中的應用

            閱讀:499      發(fā)布時間:2025-4-11
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            前言
            在蛋白質組學研究中,C18 96孔板被廣泛應用于肽段脫鹽和純化步驟,尤其適用于高通量樣本處理,為下游質譜分析提供高質量樣本。

             

             

            01


            Empore™ C18 96孔板簡介

             

            耗材專區(qū) | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽過程中的應用

            Empore™ C18膜式固相萃取96孔板專為高通量固相萃取而設計,板的每個孔內都有一個有效直徑為5.5mm的C18固相萃取膜,固相萃取膜和其上方的預過濾層被壓環(huán)固定到每個孔的底部,預過濾層可有效提高大多數(shù)生物樣品前處理流速。有效直徑是指可用于樣品處理的萃取膜實際使用直徑。標準板的單孔儲液體積為1.2mL,深孔板的單孔儲液體積為2.5mL。如果樣品或試劑的體積超過板的單孔儲液體積,可分批次加液。

            耗材專區(qū) | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽過程中的應用

            02


            Empore™ C18 96孔板技術優(yōu)勢

             

            • 高通量、低樣本損失、兼容自動化設備。
            • 致密且穩(wěn)定的膜結構消除了散裝填料孔板中存在的溝流和孔洞的問題,數(shù)據(jù)重現(xiàn)性更高。
            • 薄薄的膜結構更易被洗脫,回收率更高。

            03


            C18 96孔板脫鹽原理

             

            C18鍵合相(十八烷基硅烷)通過疏水相互作用吸附肽段,去除鹽分、去垢劑等雜質,隨后用有機溶劑洗脫肽段,實現(xiàn)脫鹽和濃縮。

            04


            實驗前準備

             

            1、材料與試劑
            • CDS Empore™ C18 96孔板(貨號:70-2007-3982-2EA,規(guī)格:6015 C18-SD PLATE, 1.2mL, 1PCS)
            • 緩沖液:

            活化/平衡液:0.1%三氟乙酸(TFA)水溶液;

            洗滌液:0.1% TFA/5%乙腈(ACN);

            洗脫液:0.1% TFA/50-80% ACN(或70% ACN/0.1%甲酸)。
            • 真空抽濾裝置或離心機(適配96孔板)
            • 肽段樣本(酶解后的復雜混合物)

            2、板預處理

            • 活化:每孔加入200μL 100% ACN,靜置1分鐘,抽干。

            • 平衡:每孔加入200μL 0.1% TFA,重復2次,確保填料親水化。

            05


            脫鹽步驟

             

            1、上樣

             

            • 將肽段樣本(溶于0.1% TFA)加入孔中。
            • 注意:樣本pH需≤3(TFA調節(jié)),以增強肽段與C18的結合。

             

            2、洗滌

             

            • 每孔加入200μL洗滌液(0.1% TFA/5% ACN),重復2-3次,去除鹽分和極性雜質。
            • 真空抽干或離心去除液體。

             

            3、洗脫

             

            • 加入50-100μL洗脫液(如0.1% TFA/50% ACN),靜置1分鐘,收集洗脫液至收集板。
            • 可重復洗脫1次以提高回收率。

             

            4、干燥

             

            • 合并洗脫液,真空離心干燥(如SpeedVac)后溶于質譜上樣緩沖液(如0.1%甲酸)。

             

            06


            關鍵參數(shù)優(yōu)化

             

            1、流速控制

             

            • 手動操作時避免流速過快(依賴重力或離心);自動化平臺可調至1mL/ min。

             

            2、有機相比例

             

            • 洗脫ACN濃度需優(yōu)化(通常50-80%),過高可能導致疏水性雜質共洗脫。

             

            3、樣本載量

             

            • 避免超載(肽段載量:100μg左右/孔),否則會導致回收率低。

             


            07


            應用場景

             

            1、質譜前處理

             

            • 去除LC-MS/MS樣本中的鹽(如SDS、尿素、磷酸鹽)。

             

            2、分級洗脫

             

            • 與高pH反相分餾聯(lián)用,提高肽段覆蓋度。

             

            3、自動化整合

             

            • 適配液體處理工作站(如Labtech EmporeOmics、Tecan、Hamil-ton) 實現(xiàn)高通量。

             

             

             

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