11
當(dāng)前位置：上海棱光技術(shù)有限公司>>技術(shù)文章>>告訴你熒光分光光度計的原理小知識
告訴你熒光分光光度計的原理小知識
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過濾過和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。
物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光.
不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜；，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進行物質(zhì)的鑒定。
在溶液中，當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時,其熒光強度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似，熒光分析通常也采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行。
熒光分光光度計的功能特點
1. 熒光發(fā)射光譜
選擇某一固定波長的光激發(fā)樣品，記錄樣品中產(chǎn)生的熒光發(fā)射強度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系，即得熒光發(fā)射光譜。
2. 熒光激發(fā)光譜
選定某一熒光發(fā)射波長記錄熒光發(fā)射強度作為激發(fā)光波長的函數(shù)，即得熒光激發(fā)光譜。
3.時間分辨技術(shù)；
可用于對混合物中光譜重疊但有壽命差異的組分進行分辨并分別測量。
時間分辨熒光測定公式如下：
P(t) = P0 EXP (-t /τ)
式中P(t)：擬合指數(shù)函數(shù)
P0：強度取值
EXP：指數(shù)運算符
t：時間取值
τ：熒光平均時間壽命