一、實驗原理
植物DNA的制備與動物DNA制備原理大致相同，為獲得高相對分子質(zhì)量DNA，應取幼嫩組織或組織培養(yǎng)物為材料，常以液氮冷凍下研磨的方法破組織和細胞。
由于植物材料DNase水平低，蛋白含量較少，其操作要求是要克服植物次生代謝物如多酚、類黃酮和植物多糖與DNA共存對制備的影響。
二、實驗用品
（一）器材
（1）冰凍高速離心機。
（2）液氮罐。
（3）臺式離心機。
（4）電熱恒溫水浴鍋。
（5）電熱恒溫培養(yǎng)箱。
（6）電冰箱，離心管和tip。
（二）試劑
（1）5mol/L Nacl：稱取NaCL 146.10g用蒸餾水定容至500ml。
（2）CTAB(十六烷基*基溴化銨)緩沖液。
A.2mol/L Tris.HCL緩沖液（pH8.0）：24.2g Tris溶于80ml重蒸水中，用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至8.0，用重蒸水定容至100ml。
B.0.5mol/L EDTA緩沖液（PH8.0）：取186.12g EDTA.Na2用重蒸水800ml溶解，然后用NaOH調(diào)節(jié)pH至8.0，加重蒸水至1000ml。
（3）巰基乙醇。
（4）PVP(聚乙稀吡咯烷酮)。
（5）石英砂。
（6）Trichloromethane：異戊醇（24：1），現(xiàn)用現(xiàn)配。
（7）異丙醇。
（8）75%乙醇。
（9）TE緩沖液：取5ml 2mol/L Tris-HCL和2ml0.5mol/L EDT.Na2。用重蒸水定容至1000ml。
（10）RNase A：取100mg RNase溶于10ml含有10mmol/L Tris(pH7.5)-15mmol/L Nacl 的溶液中，于100℃加熱15min,緩慢冷卻至室溫，分裝成小份保存于-20℃。
（三）材料
水稻幼苗或蠶豆幼苗和白菜嫩葉等。
二、實驗程序
（一）操作方法
1.操作步聚
（1）在50ml離心管中加入10ml CTAB緩沖液。
（2）取1~2g新鮮葉片（去主脈）于研缽中，加入0.1gPVP或石英砂，在液氮中迅速研磨成粉末后，把粉末轉(zhuǎn)入帶CTAB緩沖液的離心管中，邊加邊攪拌使之混合均勻。
（3）于65℃水浴保溫0.5~1h。
（4）冷卻至室溫后，加入等體積10mlTrichloromethane異戊醇溶液，顛倒混勻10min。
（5）10000 r/min離心10min，去沉淀，將上清液轉(zhuǎn)入另一離心管中。
（6）在上清液中加入1/10體積的3mol/L醋酸鈉和1倍體積的異丙醇 10ml或2倍體積乙醇，輕緩顛倒混合均勻，于-20℃放置30min。
（7）10000 r/min 4℃離心10min，去上清液。
（8）用2ml75%乙醇洗滌2次去除鹽（可放置-20℃冰箱過液）。
（9）倒去75%乙醇，37℃干燥20分鐘，再溶于600µL TE緩沖液中，轉(zhuǎn)移至1.5ml EP管。
(10)加入3µL RNase A ，37℃保溫30min。
（11）用等體積Trichloromethane異戊醇溶液抽提1~3次。
（12）10000r/min,4℃離心10min，吸取上清。
（13）上清液加入1/10體積4mol/L NaCL溶液后，加入2倍體積無水乙醇，放置20min后，10000r/min,離心5min沉淀DNA。
（14）沉淀用75%乙醇乙洗滌2~3次，37℃保溫箱中干燥后溶于適量的TE緩沖液中備用。
2得率的計算
由于1OD260的DNA濃度為50µg/ml，因此DNA得率可按下公式計算：
1g新鮮組織的DNA含量=OD260×50×溶解體積/組織鮮重（µg DNA/g）。
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