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            有了它，掌握固相萃取小柱原理會更輕松
            
        			
            閱讀：409      發(fā)布時間：2023-2-15
        				
            
							
				
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            　　固相萃取小柱是從層析柱發(fā)展而來的一種用于萃取、分離、濃縮的樣品前處理裝置。主要應(yīng)用于各種食品、農(nóng)畜產(chǎn)品、環(huán)境樣品以及生物樣品中目標(biāo)化合物的樣品前處理。固相萃取技術(shù)已經(jīng)被廣泛地使用在許多國標(biāo)（GB/T）以及行業(yè)分析標(biāo)準(zhǔn)中。
             
            　　它的容量是指固相萃取柱填料的吸附量。對于以硅膠為基質(zhì)的固相萃取柱，其容量一般在1~5 mg/100 mg，也就是柱容量是填料質(zhì)量的1%~5%。而鍵合硅膠離子交換吸附劑填料的容量以meq/g表示，即每克填料的容量為X毫克當(dāng)量。這類填料的容量通常在0.5~1.5 meq/g。
             
             
            　　固相萃取小柱原理如下：
            　　1、選擇SPE固相萃取小柱或濾膜：首先應(yīng)根據(jù)待測物的理化性質(zhì)和樣品基質(zhì)，選擇對待測物有較強保留能力的固定相。若待測物帶負電荷，可用陰離子交換填料，反之則用陽離子交換填料。若為中性待測物，可用反相填料萃取。SPE小柱或濾膜的大小與規(guī)格應(yīng)視樣品中待測物的濃度大小而定。對于濃度較低的體內(nèi)樣品，一般應(yīng)選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品。
             
            　　2、活化：萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5～10ml溶劑沖洗濾膜。一般可先用甲醇等水溶性有機溶劑沖洗填料，因為甲醇能潤濕吸附劑表面，并滲透到非極性的硅膠鍵合相中，使硅膠更容易被水潤濕，之后再加入水或緩沖液沖洗。加樣前，應(yīng)使SPE填料保持濕潤，如果填料干燥會降低樣品保固相萃取技術(shù)方法固相萃取技術(shù)方法留值；而各小柱的干燥程度不一，則會影響回收率的重現(xiàn)性。
             
            　　3、上樣：一般可采取以下措施：
            　?、儆?.1mol/L酸或堿調(diào)節(jié)，使pH<3或pH>9，離心取上層液萃??；
            　?、谟眉状肌⒁译娴瘸恋淼鞍踪|(zhì)后取上清液，以水或緩沖液稀釋后萃?。?/div>
            　?、塾盟峄驘o機鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液，調(diào)節(jié)pH值后萃取；
            　?、艹?5min后加入水、緩沖液，取上清液萃取。尿液樣品中的藥物濃度較高，加樣前先用水或緩沖液稀釋，必要時可用酸、堿水解反應(yīng)破壞藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合，然后萃取。流速應(yīng)控制為1ml/min，流速快不利于待測物與固定相結(jié)合。
             
            　　4、淋洗，反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液，可在清洗液中加入少量有機溶劑、無機鹽或調(diào)節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應(yīng)不超過一個小柱的容積，而SPE濾膜為5～10ml。
             
            　　5、洗脫待測物，應(yīng)選用5～10ml離子強度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度，則可先將洗脫液揮干后，再用流動相重組殘留物后進樣。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水，可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物，再用極性較強的HPLC分析柱如C18柱分析洗脫物。若待測物可電離，可調(diào)節(jié)pH值，抑制樣品離子化，以增強待測物在反相SPE填料中的保留，洗脫時調(diào)節(jié)pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫，收集洗脫液后再調(diào)節(jié)pH值使其在HPLC分析中達到*分離效果。在洗脫過程中應(yīng)減慢流速，用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫，回收率更高。
            
        		
            
        		
			
            
        
            
    
            
	 		 
	
            
		
            
			
            
				
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