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【概述】

    “蛋白同化制劑”又稱同化激素，俗稱合成類固醇（anabolicsteroids，AS），是合成代謝類藥物，具有促進(jìn)蛋白質(zhì)合成和減少氨基酸分解的特征，可促進(jìn)肌肉增生，提高動作力度和增強(qiáng)男性的性特征。但如果出于非醫(yī)療目的而使用(濫用)此類藥物則會導(dǎo)致生理、心理的不良后果，因此世界（WADA）把AS列入禁用物質(zhì)名單。然而，AS檢測難度很大，不僅要定量AS的濃度，還要盡可能多的篩出這些禁用物質(zhì)，而涵蓋的禁用物質(zhì)結(jié)構(gòu)各異，化學(xué)性質(zhì)差異較大，濃度線性范圍也寬，使得分析更加困難。

      TSQ 8000 Evo具備快速碰撞池技術(shù)，結(jié)合Timed-SRM掃描方式，可在35min內(nèi)實(shí)現(xiàn)5496個(gè)離子對的同時(shí)采集分析，高達(dá)七個(gè)數(shù)量級的寬線形范圍為離子檢測系統(tǒng)，而方法學(xué)指標(biāo)基本不受影響。TraceFinder工作站具有非常強(qiáng)大的QAQC功能，通過對保留時(shí)間、定量/性離子對及離子對比率等關(guān)鍵定性指標(biāo)及相關(guān)輔助定量指標(biāo)設(shè)置閾值，貼心的Flag功能通過不同顏色直觀的顯示是否符合要求。由此，分析人員可從大量組分或者大量樣品中，快速篩查出可疑的陽性組分或者陽性樣品。

【實(shí)驗(yàn)/設(shè)備條件】

部分SRM離子對信息如下：

【實(shí)驗(yàn)/操作方法】

本文利用TSQ 8000 Evo三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀，結(jié)合TraceFinder工作站，建立了高通量篩查分析的一般工作流程。

【實(shí)驗(yàn)結(jié)果/結(jié)論】

1.方法建立

      賽默飛擁有共計(jì)124個(gè)藥物及其代謝物SRM參數(shù)數(shù)據(jù)庫，每種化合物均包括保留時(shí)間、離子對及碰撞能等信息。只需從數(shù)據(jù)庫中挑選要做的組分，直接導(dǎo)入到采集方法中，即可完成方法建立。當(dāng)然，如果數(shù)據(jù)庫中全部化合物都導(dǎo)入到方法里，則可實(shí)現(xiàn)該范圍內(nèi)的篩查分析。Timed-SRM掃描功能可大大提高保留時(shí)間漂移的容忍度。

圖1.賽默飛124種化合物的數(shù)據(jù)庫

2.篩查閾值設(shè)置

      多組分篩查分析時(shí)，一般是依據(jù)化合物保留時(shí)間、定量/性離子對、離子對比率進(jìn)行判斷是否檢出。TraceFinder工作站可以對其進(jìn)行設(shè)置，如下：

圖2.相關(guān)篩查閾值設(shè)置

     關(guān)于離子對比率計(jì)算方法，軟件提供了manual、average、weighted average及l(fā)evel四種計(jì)算方式，可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行選擇。關(guān)于離子對比率允差設(shè)置，軟件提供了relativeabsolute兩種計(jì)算方式及允差范圍設(shè)置，可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行選擇。

任何一項(xiàng)超出設(shè)置范圍，TraceFinder工作站會通過相應(yīng)的Flag顯示。詳見2、4部分。

3.QAQC閾值設(shè)置

      在定量分析中，可以選擇性的設(shè)置一些閾值，使軟件按照閾值自動判斷諸如標(biāo)準(zhǔn)曲線、定量結(jié)果等數(shù)據(jù)的質(zhì)量，從而節(jié)省時(shí)間和精力。任何一項(xiàng)超出設(shè)置范圍，TraceFinder工作站會通過相應(yīng)的Flag顯示。詳見4部分。

圖3.部分QAQC功能

4.Flag設(shè)置

       2、3部分簡單的介紹了在篩查分析及日常定量分析中，TraceFinder工作站能夠給分析人員提供的一些必要判斷標(biāo)準(zhǔn)的選擇。TraceFinder工作站允許分析人員根據(jù)實(shí)際需要對這些閾值規(guī)則進(jìn)行修改并選擇不同形式的Flag顯示。具體設(shè)置界面如圖4。

      本文中，為了描述方便，僅對confirming ions coelution、Ion ratio failure、NF（peak not found）等設(shè)定了相應(yīng)的Flag。軟件會自動幫分析人員快速的進(jìn)行判斷篩選，終通過Flag形式顯示出來。由圖 7 的一系列圖可以直觀的看出，有 29 種組分未檢出，95 種組分確認(rèn)檢出。

       當(dāng)目標(biāo)組分?jǐn)?shù)目少于樣品數(shù)目時(shí)，采用Compound View功能查看，可以快速的進(jìn)行不同樣品間比較。見圖8。也可以同時(shí)結(jié)合色譜峰進(jìn)行比較查看，見圖9。

圖4. Flag設(shè)置界面

圖7. Flag顯示結(jié)果

圖8. Compound View功能

圖9.色譜峰視圖

結(jié)論

通過介紹TraceFinder工作站的強(qiáng)大功能，建立了快速篩利用功能強(qiáng)大的TraceFinder工作站，結(jié)合TSQ 8000 Evo出色的性能，可顯著提高篩查及高通量分析的效率。TSQ8000 Evo能夠在保證良好的方法學(xué)指標(biāo)基礎(chǔ)上，29.5 min內(nèi)完成數(shù)據(jù)庫里所有化合物的同時(shí)分析。在此基礎(chǔ)上，TraceFinder工作站可以預(yù)先設(shè)置相關(guān)的閾值，通過Flag功能直觀顯示出來，輔助分析人員快速的進(jìn)行篩選判斷。

【儀器/耗材清單】

賽默飛TSQ 8000 Evo三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀、TraceFinder工作站