【概述】
多氯聯(lián)苯（PCBs）是一組高毒性的有機氯化合物。根據(jù)氯取代數(shù)的不同，PCB存在209種同系物1。根據(jù)其結(jié)構(gòu)和毒理特征，可將這些同源物分為兩類。類包括12種具有類二噁英的結(jié)構(gòu)和毒性的同系物，稱為“類二噁英多氯聯(lián)苯”（DL-PCBs），其為本項研究的重點。另一類占絕大多數(shù)，不具有該程度毒性，稱為“非二噁英樣多氯聯(lián)苯”（NDL-PCBs）。
DL-PCBs已被列為持久性有機污染物（POPs），自2001年以來一直受到“關(guān)于持久性有機污染物的斯德哥爾摩約”的管制，以保護人類健康和環(huán)境安全2。這些化合物主要來源于工業(yè)加工，它們可作阻燃劑、密封劑和潤滑劑等3。DL-PCBs尤其值得關(guān)注，因為它們不容易降解，且可長距離遷移。DL-PCBs能夠在生物體內(nèi)累積，食物鏈上等級越高生物體接觸到的DL-PCBs暴露量越高。人類主要通過攝取食物接觸這些化合物，尤其是富含動物脂肪的食物4。DL-PCBs易溶于油脂而難溶于水，因而容易在脂肪組織中富集，且難以排出體內(nèi)。
DL-PCBs對人類的危害使環(huán)境中，特別是食品和動物飼料中DL-PCBs的準確檢測和定量變得至關(guān)重要。歐盟于2001年建立了一項監(jiān)測計劃，旨在限制并理想地消除二噁英和DL-PCBs在環(huán)境中的排放5，并在1883/2006號條例中規(guī)定了食品和飼料中二噁英、DL-PCBs和六種非二噁英樣PCBs（NDL-PCB）的“高水平”（Maximum Levels, ML）。歐盟還確立了一個“干預水平”（Action Level, AL），用作特定污染源的預警。ML和Al都表示為毒性當量（Toxic Equivalence Quotients,TEQ）。以高毒性的2,3,7,8-四氯二苯并對二噁英（2,3,7,8-TCDD）的毒性當量因子（Toxic EquivalenceFactor, TEF）為1，其它化合物的毒性折算為相應(yīng)的相對毒性強度，DL-PCBs的TEF值范圍0.0001（PCB77）至0.1（PCB 126）。
迄今為止，歐盟法規(guī)仍然要求采用氣相色譜/高分辨磁質(zhì)譜（GC-HRMS）對污染樣品中的二噁英和DL-PCBs做定性定量分析，高分辨磁質(zhì)譜因其靈敏度和專屬性，尤其適用于低濃度水平的檢測，也可用于食品和飼料中ML和AL水平的測定。然而，近年來氣相色譜/三重四極桿質(zhì)譜（GC-MS/MS）技術(shù)因?qū)崿F(xiàn)了高靈敏度和高選擇性分析，從而被認可用作控制食品和飼料中DL-PCBs的“高水平”（ML）的檢測5。但對于低濃度水平的檢測（即低于監(jiān)管目標水平的五分之一），仍需要采用高分辨磁質(zhì)譜進行6。
根據(jù)已修訂的歐盟法規(guī):
1.每組四極桿的分辨率設(shè)置需大于或等于單位質(zhì)量數(shù)分辨率（即足以分離相差一個質(zhì)量單位的兩個質(zhì)譜峰的分辨率）。
2.對所有標記和未標記分析物，應(yīng)使用兩個離子對（母離子-子離子）進行分析。
3.同一質(zhì)譜條件下（尤其是離子對碰撞能量與碰撞氣壓力），與計算值或測量值（標準品的平均值）相比，離子比率大允許偏差為±15％。
【實驗/設(shè)備條件】
表1. GC和進樣器條件。
四極桿的分辨率根據(jù)歐盟法規(guī)要求的大于或等于單位質(zhì)量數(shù)分辨率設(shè)定（表2）。
表2.質(zhì)譜條件。
【樣品提取】
DL-PCB標準品（68 C CVS CS 1至CS 5）購自Wellington Laboratories Inc.公司，包括DL-PCBs和13 C標記物。以下食品和飼料萃取樣品由西班牙巴塞羅那CSIC環(huán)境評估與水研究所提供：脂肪組織、魚肝、魚油、干魚、加標的飼料樣品和奶粉樣品（經(jīng)認證的標準物質(zhì)）。采用PowerPrepTMSPE系統(tǒng)萃取和凈化飼料基質(zhì)樣品，使用多層硅膠層析柱-堿性氧化鋁柱-石墨碳柱凈化處理牛奶、組織和魚樣品，后在壬烷中定容上機。
【實驗/操作方法】
本實驗評估了Thermo ScientificTM TSQTM 8000 Evo三重四極桿GC-MS/MS用于分析DL-PCBs的性能。實驗根據(jù)DL-PCBs的檢測標準，分別使用溶劑標準品、食品和飼料的基質(zhì)樣品對儀器性能進行了評價。同時，對比了采用TSQ 8000 Evo GC-MS/MS與采用高分辨磁質(zhì)譜分析的食品和飼料基質(zhì)樣品的結(jié)果。
TSQ 8000 Evo儀器使用電子電離（EI）在MS/MS模式下運行。數(shù)據(jù)采集時，為每個化合物選擇兩個選擇反應(yīng)監(jiān)測（SRM）離子對，滿足歐盟標準的要求。Timed-SRM模式下，每個色譜峰少采集12個點的數(shù)據(jù)。使用
AutoSRM軟件自動優(yōu)化所選擇的SRM離子對及其碰撞能量，結(jié)果見表3。使用Thermo ScientificTMTargetQuan3.1軟件進行數(shù)據(jù)處理，該軟件針對處理環(huán)境監(jiān)管中持久性有機污染物（POPs）的MS、MS/MS或HRMS數(shù)據(jù)而設(shè)計。
表3. DL-PCBs和13C標記物所使用的SRM離子對。
使用TargetQuan軟件進行數(shù)據(jù)處理，該軟件專為同位素稀釋法定量分析POPs而設(shè)計。軟件的定量流程基于化合物相對校正因子（或平均相對校正因子），同時包含毒性當量因子（TEF），可自動計算化合物毒性當量（TEQ），終測定總毒性當量值。
【實驗結(jié)果/結(jié)論】
本研究使用的儀器方法基于此前使用GC-MS/MS分析PCDD/Fs的方法9。儀器方法沿用了Timed-SRM模式，與傳統(tǒng)的分段掃描模式相比，Timed-SRM基于已知化合物的保留時間，在保留時間窗口內(nèi)對目標化合物進行質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集，從而提高目標化合物的分析效率，提高儀器靈敏度，降低方法檢出限。此外，通過Timed-SRM可單獨設(shè)置與待測物保留時間非常接近的13 C同位素標記物的采集通道。
色譜法
使所有DL-PCB異構(gòu)體得到充分的色譜分離，是可靠定性、定量分析的關(guān)鍵。本實驗用低濃度的標準品（CS1：1 pg/µL）對DL-PCBs的色譜分離情況進行評估。所有待測化合物和13C標記物均能檢出，并且有良好的峰形，如圖1所示，五氯聯(lián)苯異構(gòu)體做到了<10％的峰谷分離（圖2）。
圖1.低濃度標準品（1 pg/µL）中DL-PCBs待測物的色譜分離。顯示每個化合物的一個SRM離子對（定量離子）。
圖2. CS-1標準品中五氯聯(lián)苯同分異構(gòu)體的色譜分離示例（1 pg/µL）。
達到目標檢測限
對于DL-PCBs分析來說，達到所需的檢測限對于實施常規(guī)監(jiān)測方法是至關(guān)重要的。法規(guī)要求方法的定量限（LOQ）應(yīng)約為“高水平”（ML）的五分之一5,8,9。常規(guī)二噁英分析的儀器靈敏度需考察儀器的檢測限（LOD）和定量限（LOQ），對于磁質(zhì)譜而言，LOD為3倍信噪比，而LOQ為10倍信噪比。
由于GC-MS/MS儀器在MS/MS模式下強大的抗干擾能力，采集得到的數(shù)據(jù)噪音很少或幾乎沒有，因此，需要使用其他方法計算LOD/LOQ。綜合考慮內(nèi)標物的回收率（60-120％）、離子比率和色譜分離情況，通過重復（n = 8）進樣低濃度標準品（CS1）評估儀器的LOQ值8。
在置信度99%下，綜合考慮化合物濃度和%RSD值，通過T-檢驗計算待測物的LOQ值。試驗結(jié)果表明，DL-PCBs的定量限為0.1-0.41 pg/µL，離子比率和響應(yīng)因子（RFs）在±15％范圍內(nèi)，13C-標記物的回收率在60-120％內(nèi)（圖3）。TSQ 8000 Evo GC-MS/MS可分析低濃度水平的認DL-PCBs，滿足法規(guī)對檢出限的要求7。
圖3.重復進樣一系列稀釋的樣品計算DL-PCBs的LOQ值。數(shù)據(jù)表明，待測物的LOQ值與離子比率和響應(yīng)因子值均在預期限度范圍內(nèi)。
響應(yīng)值的線性
DL-PCB的定量是基于同位素稀釋法進行的，使用RF-標準曲線計算，通過外標校正曲線計算得到的平均校正因子，對12個待測物進行定量分析1。根據(jù)標曲的五個點計算平均校正因子的偏差（RF％RSD）。實驗結(jié)果表明，所有待測物的RF % RSD值都在0.8-5.6％之間，遠優(yōu)于美國EPA6（表4）要求的15％。
表4. DL-PCBs標準曲線的線性范圍及校正因子的％RSD
樣品萃取物中DL-PCBs的定量
成功進行方法驗證以后，對六個基質(zhì)樣品中的DL-PCBs進行定量分析。所有待測樣品中的DL-PCBs均觀察得到的色譜分離，且基質(zhì)干擾少。圖4為PCB189的色譜圖示例。
圖4.魚（A）、飼料（B）和奶粉（C）樣品中存在的PCB 189的色譜分離示例。
樣品中DL-PCBs的含量以WHO-TEQ pg/g表示，并將結(jié)果與磁質(zhì)譜（GC-HRMS）所測值進行對比。數(shù)據(jù)表明，TSQ 8000 Evo GC-MS/MS可測的DL-PCBs濃度范圍非常寬，重要的是，其結(jié)果與磁質(zhì)譜所測結(jié)果始終保持一致（圖5–10）。
圖5. TSQ 8000 Evo GC-MS/MS與高分辨磁質(zhì)譜（GC-HRMS）對比分析飼料中DL-PCBs濃度（以TEQ pg/g計）。
圖6. TSQ 8000 Evo GC-MS/MS與高分辨磁質(zhì)譜（GC-HRMS）對比分析牛奶中DL-PCBs濃度（以TEQ pg/g計）。
圖7. TSQ 8000 Evo GC-MS/MS與高分辨磁質(zhì)譜（GC-HRMS）對比分析魚肝中DL-PCBs濃度（以TEQ pg/g計）。
圖8. TSQ 8000 Evo GC-MS/MS與高分辨磁質(zhì)譜（GC-HRMS）對比分析魚油中DL-PCBs濃度（以TEQ pg/g計）。
圖9. TSQ 8000 Evo GC-MS/MS與高分辨磁質(zhì)譜（GC-HRMS）對比分析魚干中DL-PCBs濃度（以TEQ pg/g計）。
圖10. TSQ 8000 Evo GC-MS/MS與高分辨磁質(zhì)譜（GC-HRMS）對比分析脂肪組織中DL-PCBs濃度（以TEQ pg/g計）。
圖11顯示了TSQ 8000 Evo GC-MS/MS與高分辨磁質(zhì)譜（GC-HRMS）所測每個樣品中的總DL-PCB濃度偏差（均小于3％）。雖然GC-MS/MS系統(tǒng)能夠滿足常量分析要求，但高分辨磁質(zhì)譜（GC-HRMS）的檢出限更低，更適合低濃度水平的研究。
圖11.六種基質(zhì)類型采用TSQ 8000 Evo與采用GC-HRMS測得的總DL-PCB濃度值（pg/g）的偏差（％）。所有結(jié)果均與HRMS的分析
離子比率豐度
將待測樣品中12個DL-PCB的離子比率（IR）與標準品（CS1–CS5）所測離子比率的平均值相比，結(jié)果表明，所有化合物的離子比率偏差均小于15％，符合歐盟法規(guī)要求（圖12）。此外，SRM的高選擇性，足以滿足定性分析要求。
圖12.對比樣品萃取物中12個DL-PCB的離子比率豐度與根據(jù)校正標準品（CS1-CS5）測得的平均IR值。
結(jié)論
實驗結(jié)果表明，TSQ 8000 Evo GC-MS/MS作為DL-PCBs常量分析的有效工具，*符合歐盟關(guān)于食品和飼料樣品中DL-PCBs分析的所有要求。
• TSQ 8000 Evo GC-MS/MS儀器依靠其高靈敏度和高選擇性，可對食品和飼料樣品中的DL-PCBs進行可靠的定性、定量分析。
• TSQ 8000 Evo GC-MS/MS結(jié)合TRACE 1310GC和TargetQuan 3.1數(shù)據(jù)處理軟件，一起構(gòu)成了復雜樣品中DL-PCBs分析的綜合解決方案。
•標準品和基質(zhì)樣品的實驗結(jié)果均展現(xiàn)出的重現(xiàn)性、線性、靈敏度和選擇性。
•基質(zhì)樣品中的DL-PCB計算值與采用高分辨磁質(zhì)譜（GC-HRMS）所測值非常一致。
【儀器/耗材清單】
采用TSQ 8000 Evo三重四極桿GC-MS/MS儀器與Thermo ScientificTM TRACETM 1310 GC聯(lián)用技術(shù)分析標準品和基質(zhì)樣品中的DL-PCBs。采用Thermo ScientificTM TriPlusTM RSH自動進樣器進樣，并在Thermo ScientificTM Trace GOLD TG-5SilMS 60 m×0.25 mm I.D.×0.25 µm色譜柱上進行化合物分離。
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