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水產(chǎn)品中呋喃唑酮?dú)埩袅康臏y定--液相色譜法
| 1.范圍 5. 儀器和設(shè)備 5.1 液相色譜儀，配有紫外檢測器。 5.2 高速組織搗碎機(jī)。 5.3 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。 5.3 離心機(jī)。 5.4 振蕩器。 5.5 蒸發(fā)燒瓶，具塞。 5.6 刻度離心管。 5.7 膜孔濾器：0.45μm。 6.色譜條件 6.1 色譜柱：C18柱, 250mm×4.6mm（id），粒度5μm。 6.2 流動相：乙腈+水+磷酸（體積分?jǐn)?shù)為40+60+0.1）。 6.3 流速：0.8mL/min。 6.4 檢測波長：365nm。 6.5 柱溫：室溫。 6.6 進(jìn)樣量：20μL。 7. 樣品測定 7.1 試樣制備 取魚、蝦、蟹、鱉等水產(chǎn)品可食部分，切成不大于5mm×5mm×5mm的小塊后混勻，經(jīng)高速組織搗碎機(jī)搗碎即可，充分混勻。 7.2 提取 稱取搗碎樣品約10g（至0.01g），加25mL二氯甲烷攪拌分散后浸泡15min，在振蕩器上振蕩5min，提取液經(jīng)無水硫酸鈉柱濾入蒸發(fā)燒瓶中，殘渣分別用25mL和15mL二氯甲烷按上述方法各重復(fù)提取一次，再用15mL二氯甲烷沖洗無水硫酸鈉柱，并采用洗耳球吹出柱中液體，濾液均濾入同一蒸發(fā)燒瓶中，濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在45℃左右水浴下減壓蒸發(fā)去除溶劑，蒸發(fā)速度控制在每秒一滴。 7.3 凈化 用1.0mL流動相和1.0mL正己烷溶解殘渣并充分洗滌蒸發(fā)燒瓶，將液體移入離心管中，在4000r/min離心5min，用尖嘴吸管移去上層正己烷層，再向離心管中加入1.0mL正己烷，混勻2min，離心，用尖嘴吸管移去上層正己烷層，下層清液經(jīng)0.45μm膜孔濾器過濾后進(jìn)HPLC分析。 7.4 測定 7.4.1 呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)工作液配制 臨用前，取呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用流動相稀釋成濃度為0.01μg/mL~1.00μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。 7.4.2 液相色譜測定 根據(jù)樣品液中呋喃唑酮?dú)埩袅壳闆r，選定峰高相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品液中呋喃唑酮響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測線性范圍內(nèi)。對標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品液等體積參插進(jìn)樣進(jìn)行測定。在上述色譜條件下，呋喃唑酮保留時間約為5.8min。 7.5 空白試驗 除不加試樣外，按7.2~7.4步驟進(jìn)行。 8. 結(jié)果計算與表述 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品液的峰高，按式（1）計算樣品中呋喃唑酮?dú)埩袅浚?font face="Times New Roman"> （h-h0）×V×1000 C=Cs × ···································（1） hs×m 式中： C──樣品中呋喃唑酮?dú)埩袅浚瑔挝粸槲⒖嗣壳Э耍?font face="Times New Roman">μg/kg）； h──樣品液中呋喃唑酮的峰高； hs──標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中呋喃唑酮的峰高； h0──空白試驗的峰高； Cs──標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中呋喃唑酮的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）； V──樣品液zui終定容體積，單位為毫升（mL）； m──樣品的稱取量，單位為克（g）。 9. 線性范圍、檢測限、回收率 9.1 線性范圍 本方法的呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)工作液線性范圍為0.01μg/mL ~1.00μg/mL。 9.2 檢測限 本方法的檢測限為1μg/kg。 9.3 回收率 本方法回收率為72.8%~96.2%。 |