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            制作凝膠時需要注意哪些細(xì)節(jié)?

            2025-4-23  閱讀(403)

            分享:
            制作凝膠是核酸電泳實(shí)驗(yàn)中的關(guān)鍵步驟,以下是制作凝膠時需要注意的一些細(xì)節(jié):


            • 試劑準(zhǔn)備

              • 準(zhǔn)確稱量:精確稱取瓊脂糖或聚丙烯酰胺等凝膠原料,以及緩沖液、添加劑等試劑,確保試劑用量準(zhǔn)確,以保證凝膠的濃度和性能符合實(shí)驗(yàn)要求。

              • 檢查試劑質(zhì)量:使用前檢查試劑的外觀、保質(zhì)期等,如瓊脂糖應(yīng)無結(jié)塊、變色等現(xiàn)象,避免使用變質(zhì)或受污染的試劑,以免影響凝膠的凝固和電泳效果。

            • 凝膠配制

              • 充分溶解:將瓊脂糖或聚丙烯酰胺加入到適量的緩沖液中,加熱攪拌使其充分溶解。加熱過程中要不斷攪拌,防止局部過熱導(dǎo)致試劑燒焦或溶液暴沸,確保凝膠溶液均勻一致。

              • 避免過度加熱:溶解瓊脂糖時,加熱至溶液澄清透明即可,過度加熱可能會破壞瓊脂糖的結(jié)構(gòu),影響凝膠的凝固性能和分辨率。

              • 添加添加劑:如需添加溴化乙錠(EB)等染色劑或其他添加劑,應(yīng)在凝膠溶液冷卻至適當(dāng)溫度后再加入,并充分混勻,避免因加入過早導(dǎo)致染色劑失效或因攪拌不勻造成染色不均。

            • 模具準(zhǔn)備

              • 清潔干燥:使用前將電泳槽和梳子等模具洗凈并擦干,避免殘留的雜質(zhì)或水分影響凝膠的凝固和與模具的貼合度。

              • 正確安裝:將模具組裝好,確保密封良好,防止凝膠溶液泄漏。對于一些可拆卸的模具,要注意各部件的安裝順序和緊密程度。

              • 放置梳子:將梳子垂直插入模具的相應(yīng)位置,確保梳子的齒與模具底部保持適當(dāng)?shù)木嚯x,一般為 1 - 2 mm,以形成合適深度的加樣孔。同時,要保證梳子放置水平,避免加樣孔出現(xiàn)傾斜或大小不一的情況。

            • 凝膠灌注

              • 控制溫度:將冷卻至約 50 - 60℃的凝膠溶液緩慢倒入模具中。溫度過高可能會燙傷手指,且會使模具變形;溫度過低則凝膠可能在倒出前就開始凝固,導(dǎo)致灌注不均勻。

              • 避免氣泡:傾倒凝膠溶液時,應(yīng)沿著模具的一側(cè)緩慢倒入,盡量避免產(chǎn)生氣泡。如果有氣泡產(chǎn)生,可以用玻璃棒或移液器輕輕將其趕出,以免影響凝膠的質(zhì)量和電泳結(jié)果。

              • 一次灌注完成:盡量一次性將凝膠溶液灌注到模具中,避免多次添加導(dǎo)致凝膠分層或不均勻。如果需要制作較厚的凝膠,可以分多次灌注,但每次灌注的時間間隔不宜過長,以免先灌注的部分凝固。

            • 凝膠凝固

              • 自然冷卻:讓凝膠在室溫下自然冷卻凝固,不要人為加速冷卻過程,如放入冰箱或用風(fēng)扇吹,否則可能導(dǎo)致凝膠收縮不均勻,產(chǎn)生應(yīng)力,影響電泳時的分離效果。

              • 避免震動:在凝膠凝固過程中,要保持模具靜止,避免震動或移動,以免破壞凝膠的結(jié)構(gòu),導(dǎo)致加樣孔變形或凝膠出現(xiàn)裂縫。

              • 檢查凝固情況:一般凝膠在室溫下放置 30 - 60 分鐘即可凝固??梢酝ㄟ^觀察凝膠表面是否平整、透明,以及用手指輕輕觸摸凝膠邊緣是否有粘性來判斷凝膠是否凝固。


            制作凝膠時,需要在各個環(huán)節(jié)嚴(yán)格控制細(xì)節(jié),以獲得高質(zhì)量的凝膠,為后續(xù)的核酸電泳實(shí)驗(yàn)提供良好的基礎(chǔ)


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