羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
使用說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名：羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Alpha-Toxin gene of Clostridium Perfringens（ELISA）
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【預(yù)期用途】 羊產(chǎn)氣莢膜梭菌病是由產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridium Perfringens）引起的，該菌是動(dòng)物生存環(huán)境中常見的一種梭菌, 它能分解有機(jī)質(zhì)中的糖, 并產(chǎn)生大量氣體和毒素, 導(dǎo)致動(dòng)物機(jī)體組織壞死、中毒甚至死亡。感染羊后可引起羔羊痢疾、羊猝疽、腸毒血癥等疾病，嚴(yán)重危害養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展。
本試劑用于檢測(cè)羊血清中產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體，可用于羊三聯(lián)四防疫苗免疫效果評(píng)價(jià)。
【原 理】
本試劑盒由預(yù)包被產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素蛋白抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)羊血清、血漿樣本中α毒素抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有α毒素抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體。
【試劑盒組成】
序號(hào) | 名稱 | 規(guī)格/96T×1 | 規(guī)格/96T×2 | 規(guī)格/96T×5 |
1 | 酶標(biāo)記物 | 11ml×1(紅蓋) | 11ml×2(紅蓋) | 26ml×2(紅蓋) |
2 | 樣品稀釋液 | 50ml×1(黃蓋) | 50ml×1(黃蓋) | 200ml×1(透明) |
3 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1(白蓋) | 40ml×1(白蓋) | 200ml×1(透明) |
4 | 底物液A | 6ml×1(白蓋) | 11ml×1(白蓋) | 26ml×1(白蓋) |
5 | 底物液B | 6ml×1(黑蓋) | 11ml×1(棕蓋) | 26ml×1(黑蓋) |
6 | 終止液 | 6ml×1(黃蓋) | 11ml×1(黃蓋) | 26ml×1(黃蓋) |
7 | 陽性對(duì)照 | 1.0 ml×1(紅蓋) | 1.5 ml×1(紅蓋) | 2.0 ml×1(紅蓋) |
8 | 陰性對(duì)照 | 1.0 ml×1(綠蓋) | 1.5 ml×1(綠蓋) | 2.0 ml×1(綠蓋) |
9 | 酶標(biāo)板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
10 | 蓋板膜 | 1 | 2 | 5 |
11 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
12 | 說明書 | 1 | 1 | 1 |
13 | 稀釋板 | 1 | 2 | 5 |
【儲(chǔ)存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個(gè)月。
包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長(zhǎng)期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按50倍稀釋（如4μl血清加入196μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對(duì)照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性/陽性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
注：樣本稀釋比例相當(dāng)于1:50。
4.混勻，蓋好蓋板膜,置37℃（推薦水浴）避光反應(yīng)30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A值）。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照的平均OD值即ODNC應(yīng)≤0.3，陽性對(duì)照的平均OD值即ODPC應(yīng)≥0.6。
【檢驗(yàn)結(jié)果的判定】
1.樣品的OD值即ODS；
2.閾值計(jì)算：SP值=（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC）；
SP值≥0.2，結(jié)果判定為陽性；SP值＜0.2，結(jié)果判定為陰性。
3.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)表明羊只抗體水平不足，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)羊血清、血漿中產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體，根據(jù)SP值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評(píng)估。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以溶解。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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