葡萄糖檢測試劑盒(GOD-POD比色法)
一、產(chǎn)品簡介：
葡萄糖(Glucose,Dextrose，Glu)又稱玉米葡糖，簡稱葡糖，化學式C6H12O6，分子量為180.16，是自然界分布廣、最重要的一種單糖，屬于多羥基醛，用酶學方法測定葡萄糖是生化檢測中的常用方法，常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法，
上述酶學法特點是：
1、靈敏度、準確度、精密度均高；
2、使用溫和的反應條件；
3、對葡萄糖有專一性，不受其他糖及還原物的干擾；
4、操作簡便；
5、適用于自動分析儀。
雅吉生物葡萄糖檢測試劑盒(GOD-POD比色法)又稱葡萄糖氧化酶法或葡萄糖氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法等，其檢測原理是在葡萄糖氧化酶的催化下，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，同時消耗溶液中的氧，產(chǎn)生的過氧化氫與氧化色原物質(zhì)反應生成紅色的醌類化合物，初始反應中過氧化氫的生成量與葡萄糖濃度成正比，分光光度計505nm進行比色測定，專門用于人或動物的血清、血漿、腦脊液、細胞、組織等樣本中的葡萄糖含量定量測定，但不宜直接檢測尿液中的葡萄糖含量，其中Glu標準(5mmol/L)=90mg/dl。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。。
二、產(chǎn)品組成：
名稱規(guī)格 | 100ml | 存儲 | |
試劑(A)：酚試劑 | 100ml | RT避光 | |
試劑(B)：酶試劑 | 磷酸鹽、4-AAP、GOD、POD | 100ml | -20℃避光 |
臨用前，酚試劑：酶試劑等比例混勻，即GOD-POD工作液，4℃保存。 | |||
試劑(C)：Glu標準(5mmol/L) | 1.5ml | 4℃ | |
試劑(D)：ddH2O | 1.5ml | RT | |
使用說明書 | 一份 | ||
三、自備材料：
1、生理鹽水或PBS
2、離心管或96孔板
3、勻漿機、離心機
4、水浴鍋或恒溫箱
5、分光光度計、酶標儀、全自動或半自動生化分析儀
四、操作步驟(僅供參考)：
1、樣本處理：
①血清、血漿、腦脊液樣品：從待測樣品中分離出的血清或血漿不應有溶血，直接測定，如超過線性范圍(30mmol/L)，用生理鹽水或PBS稀釋后測定。
②細胞樣品：
a.取適量的細胞(一般推薦>106以上)，1000g離心10min，棄上清，留取沉淀。b.用PBS或生理鹽水清洗1~2次，1000g離心10min，棄上清，留取沉淀。
c.加入200~300μl的PBS或生理鹽水勻漿，冰浴條件下超聲破碎細胞，功率300W，每次3~5s，間隔30s，重復3~5次；亦可手動勻漿，制備好的勻漿液不可離心；亦可用1~2%TritonX-100冰浴30~60min，制備好的裂解液不可離心。
③組織樣品：準確稱取適量組織樣品，按質(zhì)量(g)：生理鹽水或PBS(ml)=1：9的比例，加入生理鹽水或PBS，冰浴條件下手動或機械勻漿，2500~3000g離心10min，取上清。
2、Glu測定：
酶標儀、全自動生化分析儀Glu測定 | |||
加入物(μl) | 空白孔 | 標準孔 | 測定孔 |
ddH2O | 3 | － | － |
Glu標準(5mmol/L) | － | 3 | － |
待測樣品 | － | － | 3 |
GOD-POD工作液 | 300 | 300 | 300 |
分光光度計(1ml比色杯)、半自動生化分析儀Glu測定 | |||
加入物(ml) | 空白管 | 標準管 | 測定管 |
ddH2O | 0.01 | － | － |
Glu標準(5mmol/L) | － | 0.01 | － |
待測樣品 | － | － | 0.01 |
GOD-POD工作液 | 1 | 1 | 1 |
普通分光光度計(2ml比色杯)Glu測定 | |||
加入物(ml) | 空白管 | 標準管 | 測定管 |
ddH2O | 0.02 | － | － |
Glu標準(5mmol/L) | － | 0.02 | － |
待測樣品 | － | － | 0.02 |
GOD-POD工作液 | 2 | 2 | 2 |
①各種儀器按上表依次加入試劑。
②充分混勻,37℃水浴中孵育15min。
③立即用相應儀器測定505nm處吸光度，以空白孔(管)調(diào)零，讀取標準孔(管)、測定孔(管)的吸光度，分別記為A標準、A測定。
機器參數(shù)：
主波長 | 505nm |
反應類型 | 終點法 |
反應方向 | 升反應(+) |
計算：Glu(mmol/L)=A測定/A標準×5
參考區(qū)間：健康成年人空腹葡萄糖：3.9~6.1mmol/L(70~110mg/dl)
備注：Glu標準(5mmol/L)=90mg/dl
性能指標：
外觀 | 無色至淡黃色澄清液體 |
線性范圍 | 0~30mmol/L，r>0.990 |
變異系數(shù) | 批內(nèi)<2~5%，批間<5% |
空白吸光值 | <0.2(1cm光徑) |
穩(wěn)定性 | 密閉，6個月 |
注意事項：
1、配制好的GOD-POD工作液，4℃避光保存，1月有效；低溫試劑避免反復凍融，以免失效或效率下降。
2、測定標本用血清或以草酸鉀-氟化鈉抗凝的血漿(可抑制葡萄糖的分解)，可直接用于檢測腦脊液中的葡萄糖含量；待測樣品如不能及時測定應置于2~8℃保存，3天內(nèi)穩(wěn)定。
3、尿葡萄糖目前多采用此法進行定量測定，但不能直接檢測，需先用班氏法對尿液樣品做半定量試驗，按測出的大概含量，用蒸餾水稀釋尿液使葡萄糖含量在3mg/ml以下，再進行檢測，計算結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)即可，因為未經(jīng)處理的尿液中尿酸等還原性物質(zhì)的濃度較高，影響過氧化物酶反應，可能會造成結(jié)果假性偏低。
4、隨著時間的延長，低濃度樣品亦會顯紅色，所以15min后應及時檢測，時間不宜過久。
5、采用酶標儀未調(diào)零情況下雅吉生物空白參考范圍在0.04~0.09之間，5mmol/L標準參考范圍在0.25~0.45之間，由于儀器設(shè)備、操作方法等不同，參考范圍會有差異。
6、該試劑盒測定下限為0.1mmol/L，測定上限為30mmol/L；以肉眼觀察，濃度≤
0.6mmol/L幾乎呈無色，濃度在0.7mmol/L即可顯淡紅色，濃度≥2.5mmol/L可顯紅色，一般情況下接近上限比接近下限更準確。
7、本法線性范圍可達30mmol/L，如果樣品葡萄糖濃度過高，結(jié)果可能呈假性降低，應用生理鹽水或PBS等稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
有效期：6個月有效。
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