大腸桿菌基因組 DNA提取試劑盒(CTAB沉淀法)
一、產(chǎn)品簡介：
大腸桿菌(Escherichia coli，E.coli)屬于革蘭氏陰性短桿菌，大小0.5×1~3微米，周生鞭毛，能運(yùn)動，無芽孢，能發(fā)酵多種糖類產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，是人和動物腸道中的正常棲居菌，嬰兒出生后即隨哺乳進(jìn)入腸道，與人終身相伴，幾乎占糞便干重的1/3，獲得DNA的量很高，純度一般但足夠用于大多數(shù)分子生物學(xué)實驗，CTAB是一種陽離子去污劑，在高離子強(qiáng)度的溶液里CTAB與蛋白質(zhì)和大多數(shù)酸性多聚糖以外的多聚糖形成復(fù)合物,只是不能沉淀核酸，因此CTAB可從產(chǎn)生粘多糖的有機(jī)體如植物及某些革蘭氏陰性菌中制備純化DNA。
雅吉生物大腸桿菌基因組DNA提取試劑盒(CTAB沉淀法)是簡便的利用CTAB取大腸桿菌基因組DNA的試劑盒，其提取原理是利用蛋白酶K消化蛋白，CTAB沉淀多糖，再經(jīng)加熱使蛋白變性與DNA分離，乙醇沉淀核酸獲得基因組DNA，可進(jìn)行酶切、PCR等下游實驗。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
二、產(chǎn)品組成：
名稱 | 50T | 100T | Storage |
試劑(A): 蛋白酶K | 10mg | 10mg | 4℃ |
試劑(B): ECo 裂解液 | 1.5ml | 2*1.5ml | RT |
試劑(C): CTAB沉淀液 | 10ml | 20ml | RT |
試劑(D): 蛋白清除液 | 50ml | 100ml | 4℃避光 |
試劑(E): Eco漂洗液 | 100ml | 200ml | RT |
試劑(F): TE buffer | 50ml | 100ml | RT |
三、自備材料：
1、離心管
2、離心機(jī)
3、搖床
4、恒溫箱或水浴鍋
5、70%乙醇
四、操作步驟(僅供參考)：
1、準(zhǔn)備工作∶取0.5ml TE Buffer加至蛋白酶K中，充分混勻，配制成20mg/ml的白酶K溶液，可分裝成小份，-20保存1年有效。
2、取1.5ml菌液置于EP管，10000g 離心2min，棄上清液，再次加入1.5ml菌液，重復(fù)該步驟1次。
3、加入30ul Eco裂解液和3l白酶K溶液(20mg/ml)，充分混勻，37C孵育1h.
4、加入180ul CTAB沉淀液，充分混勻，65C孵育10min。
5、加入780ul蛋白清除液，充分混勻，12000g離心5~10min。
6、轉(zhuǎn)移上清至新EP管，加入2倍體積的Eco漂洗液，混勻，-20℃放置30min或過夜。
7、13000g 離心10min，棄上清液，加入70%乙醇洗滌沉淀。
8、13000g離心10min，棄上清液，室溫干燥DNA沉淀，加入100ul或適量TE Buffer ,溶解沉淀，-20℃保存;TE Buffer體積越大，DNA濃度越低。
五、注意事項:
1、用于裂解的噬菌體、宿主菌越新鮮，裂解越好、收獲量越大。
2、Eco 裂解液在低溫條件下會凝固，可用40~50C溫水助溶。
3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
六、有效期∶6個月有效。
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