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雙熒光素酶試劑盒

MCE 國際站：Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-K1013

中文名稱：雙熒光素酶試劑盒

存儲條件：-20℃, 1年避光保存

產品活性：MCE 雙熒光素酶試劑盒含有高純度的 D-熒光素、腔腸素以及比例優(yōu)化的反應緩沖液，實現(xiàn)哺乳動物細胞雙螢光素酶報告基因檢測。

生物活性：MCE 雙熒光素酶試劑盒中含有高純度的D-熒光素、腔腸素以及比例優(yōu)化的反應緩沖液。在雙熒光素酶反應中，首先用 Firefly Luciferase Working Solution (含D-熒光素)檢測螢火蟲熒光素酶信號；隨后，直接加入 Renilla Luciferase Working Solution (含腔腸素)，將螢火蟲熒光素酶的信號猝滅，同時產生海腎熒光素酶信號。本試劑盒具有操作簡單、檢測快捷、靈敏度高等優(yōu)點。

描述及優(yōu)勢：

MCE 雙熒光素酶試劑盒中含有高純度的D-熒光素、腔腸素以及比例優(yōu)化的反應緩沖液。在雙熒光素酶反應中，首先用 Firefly Luciferase Working Solution (含D-熒光素)檢測螢火蟲熒光素酶信號；隨后，直接加入 Renilla Luciferase Working Solution (含腔腸素)，將螢火蟲熒光素酶的信號猝滅，同時產生海腎熒光素酶信號。本試劑盒具有操作簡單、檢測快捷、靈敏度高等優(yōu)點。

操作流程：1. 配制試劑 1.1 Lysis Buffer (1×) 的配制 將 Lysis Buffer (5×) 用超純水稀釋 5 倍，配制成 1× 工作液。 1.2 螢火蟲熒光素酶工作液 (Firefly Luciferase Working Solution) 的配制 將 Firefly Luciferase Substrate 干粉管短暫離心后開蓋，加入 1 mL Firefly Luciferase Buffer 將其全部溶解并混合均勻，然后將全部溶液移入剩余的 9 mL Firefly Luciferase Buffer 中，混勻。 1.3 海腎熒光素酶工作液 (Renilla Luciferase Working Solution) 的配制 將 Renilla Luciferase Substrate 短暫離心后開蓋，加入 1 mL Renilla Luciferase Buffer 混合均勻，然后將全部溶液移入剩余的 9 mL Renilla Luciferase Buffer 中，混勻。 Note: 所有試劑使用前需平衡至室溫。螢火蟲熒光素酶、海腎熒光素酶工作液配制完成后，分裝、避光保存，避免反復凍融，-80℃可保存一年，-20℃可保存一個月。 2. 裂解細胞 2.1 細胞裂解時密度應小于 95%，細胞生長過密，易導致裂解不充分。質粒瞬轉、病毒感染細胞后，需培養(yǎng)一段時間 (一般 48 小時)使熒光素酶充分表達。 2.2 去除培養(yǎng)基，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗 1 遍，注意不要將細胞吹起。 2.3 加入適量的 1× Lysis Buffer，用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。推薦用量見下表 孔板類型 Lysis Buffer/孔 6-孔板 500 μL 12-孔板 200 μL 24-孔板 100 μL 48-孔板 50 μL 96-孔板 30 μL 2.4 將細胞培養(yǎng)板置于搖床上，室溫、輕晃孵育 15 分鐘。 注：細胞數量較高時，可適當加大裂解液用量、延長裂解時間。 2.5 將裂解物轉移到新的離心管中，4℃、12,000 rpm 離心 10 分鐘，取上清備用。 3. 熒光檢測 3.1 取 20 μL 細胞裂解物，加至 96 孔黑色不透底酶標板中。 3.2 取 100 μL 平衡至室溫的螢火蟲熒光素酶工作液加至上述反應板中，混勻后，用酶標儀測定螢火蟲熒光素酶信號。 3.3 取 100 μL 平衡至室溫的海腎熒光素酶工作液加至上述反應板中，混勻后，用酶標儀測定海腎熒光素酶信號。 3.4 結果分析：在以海腎螢光素酶為內參的情況下，用螢火蟲螢光素酶所得發(fā)光值除以海腎螢光素酶所得發(fā)光值。根據得到的比值來比較不同樣品間目的報告基因的激活程度。 注：為了確保實驗結果準確性，螢火蟲熒光素酶 (fLuc) 和海腎熒光素酶 (rLuc) 的發(fā)光值均應為相對發(fā)光值 (RLU, relative light unit)。

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