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MCE 國際站：Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件： -20℃ 保存一年避光保存，避免反復凍融。

簡介：Annexin V-EGFP/PI 細胞凋亡檢測試劑盒可方便、快捷的檢測細胞凋亡。經 Annexin V-EGFP 和 PI 聯(lián)合染色后，正常細胞基本無熒光（Annexin V-/PI-），早期凋亡細胞呈綠色熒光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡細胞及壞死細胞則呈綠色和紅色熒光（Annexin V+/PI+）。 與 FITC 相比，EGFP 的綠色熒光更強，不易淬滅，穩(wěn)定性更高。

概述：MCE Annexin V-EGFP/PI 細胞凋亡檢測試劑盒采用 EGFP 標記的重組人 Annexin PS）位于細胞膜內側；細胞凋亡早期，PS 會外翻到細胞膜外側。 Annexin V Annexin V 常作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。Annexin V 經 EGFP 標記后可發(fā)綠色熒光，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生與 FITC 相比，EGFP 的綠色熒光更強，不易淬滅，穩(wěn)定性更高。此外，本試劑盒中的碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）染色液是一種不能穿透細胞膜的紅色熒光染料，可對凋亡晚期細胞及壞死細胞染色。經 Annexin V-EGFP 和 PI 聯(lián)合染色后，正常細胞基本無熒光（Annexin V-/PI 早期凋亡細胞呈綠色熒光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡細胞及壞死細胞則呈綠色和紅色熒光（Annexin V+/PI+）。

描述：

MCE Annexin V-EGFP/PI 凋亡檢測試劑盒提供了一種快速、方便的方法來檢測細胞凋亡和壞死。在正常活細胞中，磷脂酰絲氨酸 (PS) 位于細胞膜的細胞質表面。在細胞凋亡開始時，PS 從膜的內葉轉移到外葉。Annexin V 是一種 35-36 kDa Ca²⁺ 依賴性磷脂結合蛋白，對 PS 具有高親和力。用綠色熒光 EGFP 標記的 Annexin V 可以通過與外葉上暴露的 PS 結合來識別凋亡細胞。碘化丙啶 (PI) 是一種細胞膜不透性染料，對活細胞和早期凋亡細胞有染色作用，但對晚期凋亡細胞和壞死細胞有染色作用，呈紅色熒光。染色后活細胞無熒光或僅有少量熒光（Annexin V-/PI-），早期凋亡細胞呈綠色熒光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡細胞及壞死細胞呈紅色和綠色熒光（Annexin V+/PI+）。

操作說明：1. 收集細胞：收集 1-5 × 10 個細胞。懸浮細胞：1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預冷的 PBS 輕輕重懸細胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細胞沉淀。貼壁細胞：小心吸取細胞培養(yǎng)液保存?zhèn)溆?。加?PBS 洗滌后，加入適量胰酶消化液（盡量不含 EDTA，以免影響 Annexin V 和 PS 的結合）消化細胞。加入前面收集的培養(yǎng)液，輕輕吹打細胞，制成單細胞懸液，1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預冷的 PBS 輕輕重懸細胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細胞沉淀。2. 加入 195 μL Binding Buffer，輕輕重懸細胞。3. 加入 5 μL Annexin V-EGFP，輕輕混勻。4. 加入 10 μL PI Stain，輕輕混勻。5. 室溫下避光孵育 10-20 min。注：孵育過程中可輕輕顛倒數次以加強染色效果。6. 檢測與分析流式細胞儀檢測：用流式細胞儀檢測熒光強度。注：a. 流式檢測時，EGFP 最大激發(fā)波長為 488 nm，最大發(fā)射波長為 507 nm，在 FL1 通道檢測；PI-DNA 最大激發(fā)波長為 535 nm，最大發(fā)射波長為 617 nm，在 FL2 或FL3 通道檢測。b. 建議設置三組對照：未染色組、PI 單染組及 Annexin V-EGFP 單染組。熒光顯微鏡檢測：1000 g 離心 5 min，棄去上清，加入 50-100 μL Binding Buffer 輕輕重懸細胞沉淀，涂片后用熒光顯微鏡檢測熒光強度。

注意事項：1. 熒光染料都存在淬滅的問題，染色后應盡快檢測熒光強度，且整個實驗過程盡量避光下進行。2. 若使用胰酶處理貼壁細胞，應盡可能地去除胰酶，防止 Annexin V-EGFP 降解從而導致染色失敗。3. 流式細胞儀檢測時，若 Annexin V-EGFP 單獨染色組出現(xiàn)較多 PI 假陽性細胞，可用 PBS 將 Annexin V-EGFP 稀釋 3-10 倍后再進行檢測。4. Annexin V-EGFP 和碘化丙啶（PI）均對人體有害，操作時務必小心。5. 本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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