蛋白 A 磁珠
MCE 國際站：Protein A Magnetic Beads
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：4°C 2 年
簡介：Protein A Magnetic Beads 為 IP、Co-IP 和 ChIP 實驗提供了一種快速便捷的方法。
概述：MCE Protein A Magnetic Beads 使用納米表面生物技術將 Protein A 包被在超順磁性磁珠微球表面，磁珠直徑為 200 nm。磁珠表面抗體結合位點多，非特異性結合低，使用簡便有效。MCE Protein A 免疫沉淀磁珠具有大面積特異的表面區(qū)域，從而大大縮短了抗體吸附和抗原結合的時間。 MCE Protein A 免疫沉淀磁珠適用的樣品范圍廣泛，細胞裂解液、細胞分泌液上清、血清、動物腹水以及其它的免疫抗原等均適用本產品。
描述：
MCE 蛋白 A 磁珠通常用于從血清、細胞培養(yǎng)上清液或腹水中分離抗體，以及從細胞或組織提取物中對抗原進行免疫沉淀和共免疫沉淀。蛋白 A 磁珠含有重組蛋白 A，具有 IgG 結合域。
在免疫沉淀過程中，只需要少量的磁珠，非特異性結合率低。
• 方便省時。
• 非特異性結合率低。
• 樣品損失最小。
• 抗體結合能力高達 0.5-0.8 mg/mL。
• 穩(wěn)定，一瓶解決方案。
操作說明：1. 抗原樣品的準備2. 磁珠預處理將磁珠充分混懸，取 25-50 μL 磁珠，置于 1.5 mL EP 管中，加入 400 μL 結合/洗滌緩沖液，充分混懸，置于磁力架，磁性分離，棄上清；重復以上洗滌步驟 2 次。3. 抗體與磁珠結合(1) 抗體預處理：使用結合/洗滌緩沖液將抗體稀釋至終濃度為 5-50 μg/mL。(2) 抗體-磁珠結合：將稀釋好的 400 μL 抗體加入步驟 2 處理好的磁珠中，充分混懸，置于翻轉混合儀孵育 (常溫，30 mins；4oC，2 hours)，磁性分離，收集磁珠，上清液收集于新的 EP 管中，以備后續(xù)使用。(3) 洗滌：加入 400 μL 結合/洗滌緩沖液，充分混懸磁珠，磁性分離，棄上清；重復洗滌 4 次。注：結合過程中，磁珠可能會出現(xiàn)聚團或呈片狀，屬于在正?，F(xiàn)象，不會影響實驗結果4. 抗原與抗體-磁珠復合物結合(1) 抗原-抗體-磁珠復合物結合：加入 400 μL 步驟 1 準備的抗原樣品，充分混懸，置于翻轉混合儀孵育 (常溫，30 mins；4oC，2 hours)，磁性分離，棄上清。(2) 洗滌：使用 400 μL 結合/洗滌緩沖液充分重懸磁珠，磁性分離，棄上清；重復洗滌 4 次。5. 抗原洗脫本說明書提供以下兩種抗原洗脫方案，操作者可根據(jù)后期檢測的需要選擇不同的抗原洗脫方法。a 變性洗脫法：此方法洗脫的樣品適合用于 SDS-PAGE 檢測。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入 25-50 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均勻，95oC 加熱 5 mins。分離磁珠，收集上清，進行 SDS-PAGE 檢測。b 非變性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入 25-50 μL 洗脫緩沖液，室溫孵育 10 mins；分離磁珠，收集上清至新的 EP 管，并立即滴入總體積 1/10體積的中和緩沖液 (0.1 M NaOH)，將洗脫產物 pH 調節(jié)至中性，樣品用于后期功能分析。注：本步驟洗脫的抗原為抗原-抗體復合物，如操作者需要單獨洗脫目標抗原，推薦使用交聯(lián)劑，并按相關實驗說明操作。
注意事項：1. 本產品 pH 值為 6-8，禁止凍結。2. 本產品應避免離心、干燥或凍存，禁止長時間置于磁場，可能會引起磁珠聚團，抗體結合后操作過程應輕柔，避免抗體脫落。3. 為最大限度的降低蛋白質降解，請配合使用 MCE 蛋白酶抑制劑 cocktails(MCE 產品目錄號：HY-K0010，HY-K0011)。4. 使用前請先通過查閱附錄確認抗體所屬亞型與 Protein A/G 的親和度，如親和度不佳，可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間 (30-120 mins)、提高結合緩沖液的 pH 值 (8-9) 以及降低離子強度 (25-100 mM NaCl) 等方法提高親和效率。5. 為提高磁珠在免疫沉淀反應中的特異性，可以先將抗體與樣品進行孵育，形成抗體-抗原復合物，再用 Protein A/G 磁珠捕獲復合物6. 磁珠在低 pH 的洗脫緩沖液中發(fā)生聚集屬于正常現(xiàn)象。在結合/洗滌緩沖液和洗脫緩沖液中添加終濃度為 0.1 % (v/v) 的非離子型去垢劑 (如 NP-40、Tween-20 或 Triton X-100) 可有效防止磁珠聚集。經過低 pH 洗脫操作的磁珠可以用結合/洗滌緩沖液洗滌至中性，然后用含有 0.1 % (v/v) Tween-20 的Tris Buffer (pH 7.5) 振蕩重懸磁珠，并用超聲波水浴處理 2 mins，即可使磁珠恢復均勻狀態(tài)，以上處理均不影響磁珠的抗體結合效率7. 超聲處理會使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落，所以磁珠在捕獲抗體后不宜使用該方法重懸磁珠。8. 本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。9. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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