高效液相色譜（HPLC）是色譜法的一個(gè)重要分支，其應(yīng)用范圍廣泛，對(duì)樣品的適用性廣，且不受分析對(duì)象的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制。 幾乎所有的化合物，包括高沸點(diǎn)、極性、離子化合物和大分子物質(zhì)都可以用高效液相色譜法進(jìn)行分析測(cè)定，從而彌補(bǔ)了氣相色譜法的缺點(diǎn)。 目前已知的有機(jī)化合物中，約20%可以通過(guò)氣相色譜法進(jìn)行分析，而80%需要通過(guò)高效液相色譜法進(jìn)行分析。 高效液相色譜法具有分離效率高、分析速度快、檢測(cè)靈敏度好等特點(diǎn)，可以分析分離高沸點(diǎn)且不能汽化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)。 分離與分析技術(shù)在該領(lǐng)域的重要應(yīng)用。
基本原理
色譜法的分離原理是：溶于流動(dòng)相中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，由于與固定相(stationphase)發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出。又稱(chēng)為色層法、層析法。
高效液相色譜法以經(jīng)典的液相色譜為基礎(chǔ)，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有顆粒極細(xì)的高效固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。
系統(tǒng)組成
HPLC 系統(tǒng)一般由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成。其中輸液泵、色譜柱、檢測(cè)器是關(guān)鍵部件。此外，還可根據(jù)需要配置梯度洗脫裝置、在線(xiàn)脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、預(yù)柱或保護(hù)柱、柱溫控制器等，現(xiàn)代HPLC 儀還有微機(jī)控制系統(tǒng)，進(jìn)行自動(dòng)化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。制備型HPLC 儀還備有自動(dòng)餾分收集裝置。
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