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            威尼德分子雜交儀:核酸分子雜交中雜交信號(hào)低于預(yù)期的影響因素

            閱讀:1021      發(fā)布時(shí)間:2022-7-24
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            1 放射自顯影期間膜對(duì)膠片的曝光時(shí)間不足。

             

            2 核酸轉(zhuǎn)移或結(jié)合在尼龍膜上的效率低

             

            3 目標(biāo)序列以非常低的拷貝數(shù)存在。增加加載到凝膠上的樣品量。

             

            4 沒(méi)有足夠數(shù)量的探針序列,增加探針的濃度或加入10%硫酸葡聚糖,這樣減少了溶劑體積,可以到到相同的效果。

             

            5 沒(méi)有探針同源性。

             

            6 雙鏈DNA探針未變性,或者,探針檢測(cè)儀性能下降。在使用RNA探針時(shí)發(fā)生可能更大。

             

            7 探針的比活性太低??紤]諸如標(biāo)記反應(yīng)中的探針濃度、放射性標(biāo)記的三磷酸鹽的半衰期等因素。

             

            8 雜交和/或洗滌過(guò)程中試驗(yàn)方法不佳:

             

            1)增加鹽的濃度。

             

            2)降低溫度。

             

            3)降低SDS的濃度。

             

            4)減少清洗時(shí)間。

             

            5)雜交時(shí)間太短。


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