CCK-8檢測實驗（細胞活力檢測實驗）是一種常用的細胞增殖和毒性檢測方法，通過測量細胞內(nèi)酶活性的變化，從而來評估細胞的活力。CCK-8檢測是一種簡便、快速、高靈敏度的細胞活力檢測方法，適用于多種細胞類型和實驗條件。本文主要從實驗原理、實驗步驟、注意事項等方面來介紹該實驗。
一、實驗原理
該試劑中含有WST-8，它在電子載體（1-Methoxy PMS）的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚染料formazan，生成的甲瓚物formazan的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比，因此可以用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。
活力計算:
細胞活力＊(%）=[A(加藥)—A（空白）]/［A（0加藥）—A（空白）] ×100
A（加藥）：具有細胞、CCK8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白):具有培養(yǎng)基和CCK8溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A（0加藥）:具有細胞、CCK8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
*細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力。
二、實驗步驟
1. 實驗前將細胞接種96孔板，每組鋪5個平行孔（孔的外圍一圈加PBS，以防邊緣效應(yīng)影響實驗組），在96孔板中配置100μl的細胞懸液，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時。
2. 進行CCK-8實驗，棄掉孔內(nèi)原有培養(yǎng)基并每孔加入新配制的含有終體積1/10 CCK-8試劑盒的完quan培養(yǎng)基，37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4hr（根據(jù)細胞量決定時間長短，細胞越多OD值越大且隨著孵育時間的延長OD值也會變大，最適OD值應(yīng)保持在2以內(nèi)）。
3. 在450nm處測定吸光值。
4. 計算細胞增殖率：（實驗組OD-空白組OD）/（對照組OD-空白組OD）
三、注意事項
1. 細胞接種密度要適中，過低或過高的密度都會影響實驗結(jié)果的準確性。
2. CCK-8試劑的添加量要適量，過多或過少都會影響實驗結(jié)果。
3. 培養(yǎng)時間要適當，過長或過短的培養(yǎng)時間都可能導致實驗結(jié)果的偏差。
4. 測定吸光度時，要確保酶標儀的校準準確，以獲得可靠的實驗數(shù)據(jù)。
5.如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
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