蛋白純化是指通過基因工程技術(shù)將編碼蛋白的核酸序列導(dǎo)入到宿主細(xì)胞，使其大量表達(dá)，再使用適當(dāng)?shù)募兓椒▽⑵湓隗w外純化出來，從而獲得高純度、活性和產(chǎn)量的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)可以分為原核表達(dá)系統(tǒng)和真核表達(dá)系統(tǒng)兩大類。那么你知道蛋白質(zhì)純化的原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！
一、乳糖操縱子的負(fù)調(diào)控
在沒有乳糖存在時(shí)，lac操縱子處于阻遏狀態(tài)，此時(shí)，I序列表達(dá)Lac阻遏蛋白與O序列結(jié)合，阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)錄啟動。當(dāng)有乳糖存在時(shí)，乳糖進(jìn)入細(xì)胞，經(jīng)β-半乳糖苷酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)楫惾樘牵惾樘墙Y(jié)合阻遏蛋白，使蛋白構(gòu)象變化，導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離，從而啟動轉(zhuǎn)錄。
異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）的作用與異乳糖相同，是一種作用ji強(qiáng)的誘導(dǎo)劑，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。
二、宿主菌株的選擇
（1）BL21是zui常用于原核表達(dá)的菌株之一，主要適用于非毒性蛋白的表達(dá)，具有大腸桿菌聚合酶，故可適用于tac或trc等使用大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(dá)（如：pGEX，pMAL質(zhì)粒）。
（2）BL21(DE3)在BL21菌株的染色體上整合了λ噬菌體DE3區(qū)的T7噬菌體RNA聚合酶基因，可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的表達(dá)。
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