總抗氧化能力 (ABTS 法)試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注 意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
研究意義：
測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。
測定原理：
ABTS 法是使用Z廣泛的間接檢測方法，可用于親水性和親脂性物質(zhì)抗氧化能力測定。ABTS經(jīng)氧化后生成穩(wěn)定的藍(lán)綠色陽離子自由基 ABTS+，能溶于水相或酸性乙醇介質(zhì)中，在 734nm 處有最大吸收。被測物質(zhì)加入 ABTS+溶液后，所含抗氧化成分能與 ABTS+發(fā)生反應(yīng)而使反應(yīng)體系褪色。在 734nm 檢測吸光度的變化，并以 Trolox 作為對照體系量化抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。
自備實(shí)驗(yàn)用品：
恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96 孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體 120mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 24mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：粉劑×2 瓶，4℃避光保存。
樣品的制備：
(1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品
血漿（制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 離心
10min，取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超過
30 d）后再測定。
(2) 組織樣品
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
(3) 細(xì)胞樣品
按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
操作步驟：
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 734nm。
2、 工作液的配置：臨用前取試劑二一瓶，加入 11mL 試劑一，震蕩混勻 20min 后，靜置，
取上清使用。（注意，現(xiàn)配現(xiàn)用）
3、操作表（在 EP 管中反應(yīng)）
空白管 | 測定管 | |
提取液（μL） | 10 | |
樣品（μL） | 10 | |
工作液（μL） | 190 | 190 |
充分混勻，10min 內(nèi)測定 734nm 吸光值，△A= A 空白-A 測定
注意：空白管只需測定一次，吸取工作液時不要吸到底部沉淀，若 A 測定小于 0.4，需用提取
液稀釋后檢測。
總抗氧化能力計(jì)算公式：
1、以自由基清除率表示：
ABTS 自由基清除率（％）=（A 空白-A 測定）÷A 空白×100％
2、以標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得的抗氧化劑 Trolox 的量表示：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.7021x - 0.0012 R2 = 0.9985 x:Trolox 濃度(μmol/mL)
y:吸光值差值△A
單位定義:以標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得的抗氧化劑 Trolox 的量來表示樣本的 ABTS 自由基清除能力。（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算
總抗氧化能力（μmol Trolox/g 鮮重）=（△A+0.0012）÷0.7021×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W) =1.424×（△A+0.0012）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算
總抗氧化能力（μmol Trolox/mg prot）=（△A+0.0012）÷0.7021×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×Cpr) =1.424×（△A+0.0012）÷Cpr
(3) 按細(xì)胞計(jì)算
總抗氧化能力（μmol Trolox/104cell）=（△A+0.0012）÷0.7021×V 樣÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞
數(shù)量（萬個））
= 1.424×（△A+0.0012）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個）
（3）按液體體積計(jì)算
總抗氧化能力（μmol Trolox/mL）=（△A+0.0012）÷0.7021 =1.424×（△A+0.0012）
V 樣總：加入提取液體積，1 mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，10μL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL
注意事項(xiàng)：
1. 盡量避免使用在中堿性條件下呈藍(lán)色或接近藍(lán)色的試劑，否則對本試劑盒的檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾。
2. 樣品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢劑和 DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反應(yīng)的還原劑。
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優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司 | 下載次數(shù) |
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