ZETA LIFE如何高效率轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞
細(xì)胞接種：提前 1 天將細(xì)胞接種到培養(yǎng)板，如 6 孔板，使用含 10% 胎牛血清的高糖型 DMEM 培養(yǎng)基，且培養(yǎng)基中不加雙抗，使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到 60%-80% 左右。
質(zhì)粒準(zhǔn)備：使用無(wú)內(nèi)毒素提取試劑盒提取質(zhì)粒，將其溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水中，保證質(zhì)粒濃度在 500 - 700ng/ul 左右。
復(fù)合物制備：將質(zhì)粒 DNA 與 Zeta Life Advanced Transfection Reagent 按照 1:1 的比例直接混合，例如 12ug 質(zhì)粒對(duì)應(yīng) 12ul 轉(zhuǎn)染試劑，用移液器吹吸 10 - 15 次混勻，室溫靜止 10 - 15 分鐘。
轉(zhuǎn)染細(xì)胞：將復(fù)合物加入含有(血清)細(xì)胞培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)板中，并輕輕混勻，放入 37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液。
結(jié)果分析：對(duì)于質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染，在轉(zhuǎn)染 48 - 72 小時(shí)后，通過(guò)熒光檢測(cè)來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率；在 48 - 96 小時(shí)后，檢測(cè) mRNA 或蛋白的表達(dá)情況。如果要進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24 - 48 小時(shí)左右，加入適量的藥物進(jìn)行篩選操作。
另外，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要注意使用無(wú)菌技術(shù)，防止細(xì)胞污染；細(xì)胞的狀態(tài)對(duì)轉(zhuǎn)染效率影響較大，需確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期且健康；按照試劑說(shuō)明書(shū)要求儲(chǔ)存和使用轉(zhuǎn)染試劑，避免反復(fù)凍融等。
