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深圳市安培生物科技有限公司

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產(chǎn)品分類品牌分類

血清系列: SERANA胎牛血清低內(nèi)毒素膠原蛋白 ZETA LIFE胎牛血清

細(xì)胞轉(zhuǎn)染: 活體轉(zhuǎn)染試劑 LIPO3000轉(zhuǎn)染試劑高效轉(zhuǎn)染試劑

支原體清除: 支原體去除試劑

細(xì)胞凍存: 無血清細(xì)胞凍存液

實(shí)驗(yàn)耗材: 多功能開關(guān)器封板膜 PCR & qPCR 孔板 qPCR耗材 PCR耗材

分子試劑: RNA提取等溫?cái)U(kuò)增克隆突變 PCR系列核酸提取純化核酸染料

細(xì)胞增殖與凋亡: 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒細(xì)胞增殖及毒性檢測

Biozellen系列: 鼠尾膠原蛋白 3D基質(zhì)膠

培養(yǎng)基: 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞添加劑無血清培養(yǎng)基

ELISA試劑盒: 豬ELISA試劑盒小鼠ELISA試劑盒

TOYOBO（東洋紡）: PCR相關(guān)試劑

ZYMO RESEARCH: 試劑盒

Greiner（格瑞納）: 細(xì)胞培養(yǎng)小室

IKA（艾卡）: 刀頭

化學(xué)發(fā)光底物（ECL）: ECL化學(xué)發(fā)光液

PROSPEC系列: 單胺氧化酶

Epigentek系列: 細(xì)胞分析試劑盒

微生物檢測: 生化鑒定試劑盒

細(xì)胞生物學(xué): 細(xì)胞輔助試劑細(xì)胞檢測試劑

Corning康寧: 凍存管嵌套/小室

解離試劑: 胰蛋白酶

細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材: 細(xì)胞培養(yǎng)瓶細(xì)胞培養(yǎng)皿細(xì)胞培養(yǎng)板

原代細(xì)胞: 小鼠原代細(xì)胞

植物檢測系列試劑盒: 植物激素系列植物氧化與抗氧化系列植物氮代謝系列植物脂肪酸代謝系列植物固氮作用系列植物呼吸作用系列植物光合作用檢測試劑盒

SERANA: BSA

細(xì)胞系: 人源細(xì)胞系

生化試劑盒

環(huán)境檢測系列試劑盒（AKEN）: 土壤氧化還原酶系列

類器官培養(yǎng): 培養(yǎng)試劑盒

緩沖器和解決方案: 抗生素培養(yǎng)添加物隱窩增強(qiáng)劑保護(hù)液洗滌液凍存液解離液

生物三凝膠基質(zhì): 細(xì)胞外基質(zhì)

細(xì)胞因子分子: 抑制劑激動劑

生物樣本庫: 類器官

蛋白研究系列: 蛋白緩沖 ALP發(fā)光液 ECL系列轉(zhuǎn)印膜轉(zhuǎn)膜封閉 PAGE凝膠試劑盒蛋白電泳蛋白制備免疫檢測

修飾檢測試劑盒: 蛋白修飾檢測試劑盒

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神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

時間：2023/1/5閱讀：1455

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材料與儀器

大鼠
CMF-Hanks液胰蛋白酶 DMEM F12
水浴鍋培養(yǎng)箱

步驟

一、原代培養(yǎng)

1. 選用生后1周的新生大白鼠，用碘酒,酒精棉球消毒，斷頭取其大腦皮層組織。

2. 解剖顯微鏡下，剝離腦膜，切除大腦髓質(zhì)部分。

3. 將大腦皮質(zhì)在無Ca2+、Mg2+Hanks液(CMF-Hanks液)中剪碎。

4. 室溫下靜置10 min。

5. 在37℃水浴箱中用0.125%的胰蛋白酶(用CMF-Hanks液配制)消化30 min。

6. 加入少許含20%血清的DMEM/F12(DMEM與F12為1:1)混合培養(yǎng)液(下同)，用吸管稍加吹打至胰酶液與培養(yǎng)液混勻。離心5 min(1 000 r/min)。

7. 吸去上清含酶液，重新加入含血清培養(yǎng)液，用吸管反復(fù)吹打至組織塊消散為止。制成細(xì)胞懸液(暫稱初細(xì)胞懸液)。

8. 將初細(xì)胞懸液接種到玻璃瓶(或培養(yǎng)皿)中，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育30 min。

9. 翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,吸出瓶中的細(xì)胞懸液。用孔徑為75μm的不銹鋼網(wǎng)過濾。

10. 將濾過液離心10 min(1 000 r/min)，濃縮成約3ml的細(xì)胞懸液(暫稱為次細(xì)胞懸液)。

11. 將次細(xì)胞懸液種植到預(yù)先涂布有多聚賴氨酸的培養(yǎng)瓶中。接種的細(xì)胞密度約1×104個/cm2。

12. 置CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-5h,再補(bǔ)加足夠的培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)9-14 h。培養(yǎng)液顏色略微變黃時換液。

二、原代培養(yǎng)物的傳代

1. 吸取舊培養(yǎng)液用CMF-Hanks液洗滌2次。

2.加入少許0.125%的胰蛋白液消化15 min。以有血清培養(yǎng)液終止胰酶活性。

3.稍事手動搖晃,倒掉含酶液。加入有血清培養(yǎng)液。

4.用吸管反復(fù)吹打使細(xì)胞從培養(yǎng)瓶壁脫落。收集細(xì)胞懸液,離心10 min(1 000 r/min)。棄上清液，給細(xì)胞沉淀物再加入培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液。

5.重復(fù)原代培養(yǎng)時8-10步。

6.將細(xì)胞懸液按0.5×105個/cm2的密度種植在經(jīng)鼠尾膠原包被的培養(yǎng)瓶中。

7.送入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-5 h，再加足夠的培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。

三、結(jié)果

分離的大鼠大腦皮質(zhì)細(xì)胞在原代培養(yǎng)4 h后，部分細(xì)胞即可長出細(xì)小胞突。培養(yǎng)3-4 d之后，細(xì)胞數(shù)量便明顯增大。大鼠大腦皮質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)一般在9-14 d，以星形膠質(zhì)細(xì)胞為主的細(xì)胞即可長滿培養(yǎng)瓶壁。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。

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