PriCells: 體內(nèi)DPSCs的成牙和成骨分化                   

試劑和材料：
1. 無鎂和鈣的PBS平衡鹽溶液（PBSA）；
2. MSC培養(yǎng)基：含2mmol/L 谷氨酰胺的α-MEM，添加15%胎牛血清，0.1mmol/L左旋抗壞血酸磷酸鹽，100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素；
3. 胰蛋白酶-EDTA溶液：0.05%胰蛋白酶，0.54mmol/L（0.2%）EDTA，無鎂和鈣的PBS平衡鹽溶液溶解；
4. 凍存管，1.8ml；
5. 合適的載體（羥基磷灰石/磷酸三鈣載體，HA/TCP）；

實(shí)驗(yàn)方法：
1. 用MSC培養(yǎng)基培養(yǎng)，直到細(xì)胞到達(dá)90%匯合；
2. 用PBSA洗培養(yǎng)皿，洗3次；
3. 加足夠體積的胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃孵育；
4. 確定80%的細(xì)胞已從培養(yǎng)容器表面脫離，然后加MSC培養(yǎng)基；
5. 500g，離心6min；
6. 倒掉上清，用MSC培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
7. 細(xì)胞計(jì)數(shù)；
8. 將重懸于MSC培養(yǎng)基的（2-4）×10⁶個(gè)細(xì)胞和載體混合，置于1.8ml凍存管中；
9. 37℃旋轉(zhuǎn)孵育1h；
10. 無菌條件下，將混合物移植到免疫力低下的小鼠皮下。我們通常使用N1H的bg-nu/nu-xid小鼠進(jìn)行移植；
11. 在合適的時(shí)間點(diǎn)，收集移植物，組織學(xué)檢測。（在HA/TCP載體和bg-nu/nu-xid小鼠體系中，8周的時(shí)間足夠DPSCs和SHED形成充分的礦化基質(zhì)。收集的時(shí)間點(diǎn)主要決定于體系。）